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TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937细胞的激活作用
目的用sTNFRⅠ预先激活TM-TNF-α介导的反向信号,观测其对sTNF-α激活单核细胞系U937细胞的影响. 方法预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用30 min,洗涤后加入sTNF-α作用不同时间,观测预激活反向信号对sTNF-α刺激U937产生活性氧、胞内促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录及IκB-α水平(Western blot)的影响. 结果单独用sTNFRⅠ激活的反向信号并不影响U937细胞的功能,而预激活反向信号能协同增强sTNF-α刺激U937细胞产生活性氧,且呈sTNFRⅠ浓度、sTNF-α浓度依赖关系;预激活反向信号协同增强sTNF-α刺激U937炎性细胞因子mRNA(TNF-α、IL-1β、IL-8等)的转录水平;并促进U937细胞IκB-α的降解. 结论预先激活TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937的激活作用,提示反向信号可能参与机体对早期炎症反应的调节.
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两型TNF-α及其受体在胸主动脉缩窄诱导压力负荷心肌肥厚小鼠中的表达
目的：检测压力负荷所致心肌肥厚小鼠模型心肌组织中两型TNF及其受体的表达。方法使用野生型BALB/c小鼠，将其分为假手术组（n=10只）和手术组（n=8只），通过胸主动脉缩窄术诱导压力负荷性心肌肥厚模型。术后2周处死小鼠，并对小鼠进行心脏形态学、血流动力学检测；使用Western Blot方法对心肌组织中两型TNF-α及其受体表达进行检测。结果（1）在BALB/c小鼠中成功建立胸主动脉缩窄诱导心肌肥厚模型；（2）术后2周手术组小鼠心脏组织中可见分泌型TNF-α和跨膜型TNF-α表达量均有增加，且分泌型TNF-α表达量明显高于跨膜型TNF-α，差异有统计学意义（P＜0.05）；（3）术后2周小鼠心脏组织中TNFR1和TNFR2表达量均有增加，但TNFR1表达量高于TNFR2（P＜0.05）。结论在小鼠压力负荷诱导心肌肥厚模型中，两型TNF-α及其两种受体表达量均有增加。虽然起负性肌力作用的分泌型TNF-α及TNFR1表达起主导作用，其研究相对集中且广泛，但跨膜型TNF-α和TNFR2表达量增加提示其在这一病理过程中具有生物学作用。其作用和机制仍需进一步研究。
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n-3 PUFA依赖的跨膜型肿瘤坏死因子-α真核表达载体的构建
目的构建n-3多不饱和脂肪酸依赖的跨膜型肿瘤坏死因子-α(tmTNF-α)真核表达载体.方法设计并合成包含PPRE增强子的tk启动子序列,与人突变型tmTNF-α真核表达载体pcDNA3-TNF(△1-12)WB重组,构建pPPRE-tk-tmTNF-α表达载体,转染人乳腺癌MCF-7细胞,经EPA处理后,应用免疫荧光技术检测tmTNF-α蛋白的表达.结果经琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定证明pPPRE-tk-tmTNF-α真核表达载体构建成功,转染此重组表达载体的MCF-7tmTNF-α细胞tmTNF-α表达受EPA正调控,两者之间呈时间、剂量-效应关系.结论成功构建受n-3 PUFA正调控的tmTNF-α真核表达载体.
关键词： n-3多不饱和脂肪酸 跨膜型肿瘤坏死因子-α PPRE 真核表达
