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淋病奈瑟菌NspA原核表达及其抗原性研究
目的 研究淋病奈瑟菌表面蛋白A(NspA)的抗原性及其在淋病快速诊断技术中的应用价值.方法 用PCR技术克隆淋病奈瑟菌NspA基因,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中表达重组NspA,表达产物复性后免疫小鼠,Western blot、ELISA分别检测免疫血清与淋病奈瑟菌细胞裂解液中NspA及与淋病奈瑟菌全细胞的结合能力.结果 NspA基因可在大肠杆菌中表达,纯化并复性的重组NspA(rrNspA)可在小鼠体内刺激产生高效价特异性抗体,抗rrNspA抗体可与淋病奈瑟菌完整细胞及细胞裂解液中NspA特异性结合.结论 获得的rrNspA及抗rrNspA抗体在建立淋病奈瑟菌抗体或抗原快速检测方法中具有潜在的应用价值.
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淋球菌NspA 核酸疫苗小鼠体内诱生保护性抗体研究
目的 进一步研究前期构建淋球菌NspA真核细胞表达质粒pcNspA 作为淋病核酸疫苗的可行性.方法 将pcNspA分别通过肌内注射(IM)、滴鼻(IN)和阴道接种(IVAG)等3种途径免疫BALB/c小鼠,对免疫鼠的血清、支气管肺泡和阴道洗液等样品分别用间接ELISA检测淋球菌特异性抗体的类型和效价,比较不同接种途径刺激小鼠体内特异性抗体水平的差异以及相应抗体的体外溶菌活性.结果 pcNspA质粒经滴鼻免疫和肌内注射均可在小鼠体内诱导产生较高的特异性体液免疫水平,尤其是滴鼻免疫途径不仅可诱生较高水平的血清IgG抗体(1∶1 600),而且在支气管肺泡洗液和阴道洗液中均可检测到特异性sIgA的存在.而阴道接种pcNspA质粒仅能在阴道局部检测到较低水平的特异性sIgA.用pcNspA质粒诱生的血清IgG抗体做体外溶菌活性实验,证实滴鼻免疫小鼠血清具有溶菌活性.结论 淋球菌NspA基因疫苗可在小鼠体内诱导产生特异性抗体,并对机体有免疫保护作用;滴鼻可能是淋球菌NspA核酸疫苗的一个有效接种途径.
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淋病奈瑟菌表面蛋白A真核表达载体的构建及表达
目的 构建淋病奈瑟菌外膜蛋白--奈瑟菌表面蛋白A(neisseria surface protein A,NspA)的真核表达载体并使其在真核细胞中表达.方法 用PCR方法扩增NspA基因,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1(+)/NspA.以脂质体法转染RAW264.7和COS-7细胞,用RT-PCR检测NspA mRNA的水平,免疫组化染色法检测蛋白表达.结果 扩增的目的 基因包括了全段NspA基因,长度约525 bp.以脂质体转染RAW264.7和COS-7细胞后,用RT-PCR和免疫组化染色法检测表明,细胞可转录和表达NspA.结论 成功构建了重组真核表达载体pcD-NA3.1(+)/NspA,并在真核细胞中得到表达,为研究此蛋白的免疫原性以及淋病基因疫苗的研制提供了物质基础.
