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铁离子调节蛋白A文献资料
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问号钩端螺旋体铁离子调节蛋白A的免疫原性及保守性研究
目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans,简称钩体)黄疸出血群赖型赖株中铁离子调节蛋白A(IRPA),研究IRPA的免疫原性和在不同钩体菌种中的保守性,探讨其在致病和疫苗研究中的意义.方法 生物信息学软件分析预测IRPA的特征.构建原核表达质粒pQE31-IRPA,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western blot鉴定表达情况.用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western blot检测其免疫原性和在不同血清型钩体中的保守性.ELISA和Western blot检测钩体全菌兔抗血清中的IRPA抗体.结果 生物信息学预测结果显示,IRPA是可能位于外膜的脂蛋白,在钩体内有多个蛋白可能与之相互作用.成功克隆表达了重组质粒pQE31-IRPA,重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1:32 000),并能与相应抗体反应,具有良好的免疫原性.在15株不同血清型的问号钩体及1株双曲钩体(L.biflex)中均可检测到重组蛋白的表达,并在钩体全菌兔抗血清中检测到其抗体.结论 IRPA具有良好的免疫原性和保守性,为进一步研究其在钩体病中的作用机制及其作为候选基因疫苗的研究奠定了基础.
