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RNA结合活性文献资料
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丙型肝炎病毒N′-核心蛋白RNA结合区的定位
目的对丙型肝炎病毒核心蛋白的RNA结合区进行详细定位,为制备缺失RNA结合活性突变体做准备. 方法构建GST融合丙型肝炎病毒核心蛋白不同区域片段表达质粒,在大肠杆菌中表达相应蛋白并用glutathione sepharose 4B进行纯化,利用二次电泳法检测RNA的结合活性,利用时相差电泳法比较不同区域RNA结合活性的强弱. 结果核心蛋白第1～132位氨基酸(AA)之间的片段得到了良好的表达和纯化, 表达的蛋白经Western blot得到确认.二次电泳后的放射自显影结果显示,第1～10 AA、19～45 AA、80～132 AA片段无RNA结合活性, 而含有10～16 AA,45～80 AA的片段可结合单链和双链RNA.1～29 AA与38～90 AA 2个片段对RNA的结合强度基本相同. 结论丙型肝炎核心蛋白中存在2个RNA结合区,分别定位于10～16 AA及45～80 AA.2个结合区都具有较强的RNA结合活性.制备RNA结合活性缺陷突变体须同时对2个结合区进行突变.
