肺炎球菌荚膜多糖和溶血素结合疫苗的制备及其免疫原性的研究

目的 研制肺炎球菌荚膜多糖(PS)与肺炎球菌溶血素(蛋白)偶联结合疫苗.方法 用PCR扩增肺炎球菌溶血素(Pn)基因,将其克隆入表达载体pET-28a质粒中,然后转化大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞,并以IPTG诱导进行蛋白质表达,对所得蛋白质用固相Ni-NTA树脂作纯化,再用SDS-PAGE鉴定表达的纯化蛋白(rPn).以福尔马林脱毒rPn,去除其溶血活性,然后用氨基还原法将脱毒的rPn与PS(19F血清型)偶联结合,加入铝佐剂制备成疫苗.以该疫苗腹腔注射接种小鼠,用ELISA法检测小鼠血清中抗PS及抗Pn的体水平.结果 成功扩增和克隆了Pn基因,经诱导表达得到rPn蛋白,纯化后纯度达90%以上.PS与Pn结合物经凝胶层析柱分离,其洗脱峰较PS与Pn二峰明显前移.用该结合疫苗免疫的小鼠血清中抗PS(19F)抗体及抗Pn抗体的效价均明显高于阴性对照组(P＜0.01).结论 用基因工程技术制备的肺炎球菌溶血素作为蛋白载体,脱毒后与肺炎球菌多糖偶联而成的结合疫苗能在小鼠体内诱导出明显的免疫应答反应.

肺炎球菌溶血素提取及其免疫学效果观察

目的提取23F型肺炎球菌溶血素(PLY),并对其免疫原性、抗原性及保护效果进行初步观察.方法通过离子交换层析、疏水共价层析和排阻层析,从23F型肺炎球菌中提取PLY,以20μg的PLY免疫小鼠(0、14及21 d),末次免疫后14 d用23F、9V和2型肺炎球菌从鼻腔粘膜攻击,观察保护效果.结果成功获得PLY,并能诱导小鼠产生较高水平的相应抗体;试验组小鼠存活率显著高于对照组小鼠.结论 PLY具有良好的免疫原性,对小鼠具有特异保护作用和交叉保护作用.

肺炎球菌溶血素的纯化及其免疫效果

目的 从6B、9V、14、19F型肺炎球菌培养物中纯化肺炎球菌溶血素(PLY),并检测其免疫原性和保护作用.方法 采用自溶、硫酸铵沉淀及三步柱层析法纯化PLY,并检测PLY免疫NIH小鼠后血清抗体滴度及其保护效果.结果 纯化的6B、9V、14、19F型PLY纯度依次为83.4%、99.2%、70.1%和76.6%;9V型PLY表观相对分子质量为52840,与文献报道的53000相一致.从4种血清型肺炎球菌中纯化的PLY均能诱导小鼠产生高且稳定持久的抗体滴度.各免疫组小鼠分别感染6B、9V、14、19F型肺炎球菌,存活率均显著高于对照组.结论 4种血清型PLY均具有良好的免疫原性和保护作用.

086 肺炎球菌溶血素和CbpA免疫接种诱导的抗肺炎球菌作用

肺炎球菌溶血素溶血活性致大鼠脑损伤机制研究

目的 溶血活性是肺炎球菌溶血素(pneumolysin,PLY)的重要生物学特性之一.运用不同溶血活性的PLY建立脑损伤模型,探讨溶血活性对PLY致大鼠脑损伤的作用机制. 方法 4周龄大鼠,经左侧颈内动脉注入等剂量溶血活性缺失的PLY[PLY(-)]及溶血活性正常的PLY[PLY(+)],观察脑组织神经损伤情况及炎症因子水平. 结果 PLY(+)组脑组织神经元烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)[(122.495 ±4.852)％]及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)水平[(135.697±2.727)％]较PLY(-)组及等渗盐水(NS)对照组[(80.467±2.460)％,(89.622±3.226)％]均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),PLY(-)组NSE[光度值(102.081 ±2.150)％]及GFAP水平[光度值(96.323-±4.113)％]也高于对照组(NSE光度值80.467±2.460,GFAP光度值89.622±3.226),差异有统计学意义(P＜0.05);PLY(+)组TNF-α及IL-6水平[(103.902±3.221)、(52.030±1.817)ng/mL]较PLY(-)组[(94.152±3.032)、(41.628±2.972) ng/mL]及NS对照组[(69.986±3.567)、(21.246±3.118) ng/mL]均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),PLY(-)组TNF-α[(94.152±3.032) ng/mL]及IL-6水平[(41.628±2.972) ng/mL]也较NS对照组[(69.986±3.567) ng/mL,(21.246 ±3.118) ng/mL]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 溶血活性在肺炎链球菌造成脑损伤过程中具有重要作用,并且一定程度上可促进炎性因子释放.