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质粒疫苗文献资料
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基于Ii分子的HCV-NS3内源性靶向基因疫苗的构建及免疫应答研究
目的 构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗并在真核细胞中表达,用构建的基因疫苗免疫BALB/c小鼠,研究免疫后小鼠的体液和细胞免疫应答.方法 通过3轮PCR以HCV-NS3的TH1表位(1248～1261 AA)取代Ii链CLIP片段编码基因,构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗,并在Cos-7细胞中表达;30只6～8周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为5组,用内源性靶向基因疫苗(pHCV-NS3-TH1)和非靶向疫苗(pHCV-NS3)于股四头肌进行免疫,生理盐水、pCI-neo和以I-neo-Ii作为研究对照,经过5次免疫后,取外周血对小鼠的体液免疫进行检测,取小鼠脾脏细胞对细胞免疫进行检测.结果 内源性靶向基因疫苗在Cos-7细胞中得到高效表达;对BALB/c小鼠的免疫结果显示,只有HCV-NS3免疫组小鼠可以检测到针对NS3的特异性抗体,抗体滴度达到1/1024;pHCV-NS3和pHCV-NS3-TH1免疫的小鼠都可以检测到CD4+细胞的增殖,但pHCV-NS3-TH1免疫的小鼠CD4+细胞的增殖强度要明显大于pHCV-NS3免疫的小鼠(P=0.002);在细胞因子的检测中,只有pHCV-NS3-TH1免疫组小鼠检测到IFN-γ,浓度达到33.65 pg/ml;只有HCV-NS3免疫的小鼠产生IL-4,浓度达到4.55pg/ml.结论 基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗能够在真核细胞中表达并刺激小鼠产生CD4+TH1类型的细胞免疫,为HCV的疫苗开发提供了一个新思路.
