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霍乱弧菌以thyA基因为选择压力的染色体-质粒致死平衡系统的构建
目的 为构建霍乱弧菌口服活疫苗提供稳定实用的载体系统.方法 在改良MM基本培养基的基础上,建立了霍乱弧菌thyA基因突变菌株的筛选方法,继而用PCR插入法克隆了大肠杆菌thyA基因全序列(pXXB106),并电击转化入霍乱弧菌thyA基因缺陷株(PL102),使后者在MM改良培养基上的生长恢复为野生状态.结果 选育出的thyA基因突变的霍乱弧菌IEM101菌株PL102突变性状及生物学性状基本稳定.进而构建了以thyA基因为选择压力的霍乱弧菌染色体-质粒致死平衡系统.结论 构建成的抗原呈递系统作为构建肠道疫苗的受体菌株是稳定的,也是适用的.
关键词： 霍乱弧菌 胸苷酸合成酶基因 染色体-质粒致死平衡系统 -
胃癌患者TYMS、ERCC1基因型在外周血和肿瘤组织中的多态性
目的:检测胃癌(gastric cancer,GC)患者外周血和肿瘤组织中胸苷酸合成酶基因(thymidylatesynthase,TYMS)和切除修复交叉互补基因l(excision repair cross-complementing 1,ERCC1)的多态性,比较各基因型在外周血和肿瘤组织中是否一致.方法:收集43例GC患者术前抗凝外周血及肿瘤组织,将其分为外周血组与肿瘤组织组.应用PCR法和限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法分别检测外周血与肿瘤组织中TYMS和结果:TYMS和RCC1基因各基因型与GC患者临床病理因素无显著相关(P＞0.05).外周血与肿瘤组织中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型检出率76.7％、23.3％,ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型检出率为81.3％、18.7％,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:GC患者外周血和肿瘤组织中TYMS与ERCC1基因各基因型检出率一致,提示外周血标本可代替肿瘤组织标本对TYMS与ERCC1基因多态性进行检测.
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乳腺癌石蜡肿瘤组织和相应血液细胞BRCA1、ERCC1、TS mRNA的表达相关性研究
目的 探讨乳腺癌石蜡肿瘤组织和相应血液细胞中乳腺癌易感基因1 (BRCA1)与切除修复交叉互补基因1(ERCC1)及胸苷酸合成酶(TS)基因表达的相关性,同时探讨BRCA1、ERCC1、TS在乳腺癌肿瘤组织与对应患者血液细胞中表达的关系.方法 收集53例乳腺癌肿瘤石蜡标本及其对应的血液样本,利用实时荧光定量PCR技术检测肿瘤石蜡组织和对应血液样本中BRCA1、ERCC1、TS mRNA的表达水平;利用Pearson相关性分析方法分析肿瘤石蜡组织和相应血液细胞BRCA1、ERCC1、TS mRNA表达的相关性以及肿瘤石蜡组织细胞BRCA1、ERCC1、TS mRNA之间表达的相关性.结果 乳腺癌石蜡组织中BRCA1 mRNA表达的△CT为(7.516±2.257),对应的血液组织中为(10.374±2.519).乳腺癌石蜡组织中ERCC1和TS mRNA表达的△CT分别为(6.114±2.944)、(5.950±2.604),对应的血液组织分别为(8.801±2.581)、(10.078±1.731).Pearson相关性分析显示,BRCA1、ERCC1在肿瘤石蜡组织与血液组织中的表达均呈正相关(r=0.607、0.537,P＜0.05).肿瘤石蜡组织与血液组织中的TS表达无相关性(r=0.074,P＞0.05).BRCA1与ERCC1在肿瘤石蜡组织中的表达无相关性(r=0.250,P＞0.05).BRCA1与TS在肿瘤石蜡组织中的表达无相关性(r=0.256,P＞0.05).ERCC1与TS在肿瘤石蜡组织中的表达无相关性(r=0.169,P＞0.05).结论 乳腺癌患者的血液标本也许可以替代其肿瘤石蜡组织检测BRCA1和ERCC1 mRNA的表达;BRCA1与ERCC1、TS的表达无相关性.
关键词： 乳腺癌 乳腺癌易感基因1 切除修复交叉互补基因1 胸苷酸合成酶基因 -
胸苷酸合成酶基因多态性与不同种族乳腺癌FEC方案化疗不良反应相关性研究
目的 了解胸苷酸合成酶基因(TYMS)多态性在乳腺癌患者中的分布及其基因型与化疗不良反应的关系.方法 选取雌激素受体基因5 '端非编码区的28 bp串联重复序列(VNTR)作为遗传标记,运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法对50例白种人和23例亚裔乳腺癌患者进行基因分型,结合患者临床病理特征、FEC化疗不良反应和生存数据进行分析.结果 TYMS 28 bp VNTR基因型在白种人群2R/2R、2R/3R和3 R/3R的基因型频率分别为12.0％、62.0％和26.0％,在亚裔人群分别为4.4％、30.4％和65.2％,差异有统计学意义(P＜0.05).TYMS 28 bp VNTR位点的等位基因及基因型与患者组织学类型、组织学分级、淋巴结转移、临床分期、雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体-2表达等无关.所有患者平均随访时间43.21个月,复发5例,死亡5例;单因素及多因素分析提示TYMS基因型不是影响预后因素.亚裔人群化疗后3-4级白细胞减少症发生率显著高于白种人群(86.96％ vs 60.00％,P=0.021);TYMS 28 bp VNTR3R/3R基因型中,3-4级白细胞减少症发生率高于2R/3R、2R/2R,但差异无统计学意义(75.00％ vs 65.79％,57.14％,P=0.578).结论 白种人与亚裔乳腺癌患者FEC化疗耐受性存在差异,可能与两者TYMS基因28 bp VNTR多态性差异有关.
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RNAi对人乳腺癌MCF-7细胞E2F1、TS基因表达的抑制作用
目的 观察RNA干扰(RNAi)技术对乳腺癌细胞MCF-7中E2F1、胸苷酸合成酶(TS)基因表达的靶向抑制作用.方法 设计合成并构建重组质粒Psiren-E2F1,将重组质粒转染MCF-7细胞.筛选稳定转染的单克隆细胞扩大培养,应用RT-PCR方法检测各组细胞E2F1、TS Mrna表达情况.结果 转染组E2F1、TS基因表达均受到抑制.结论 RNAi技术特异、高效抑制靶基因E2F1及TS表达.
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RT-PCR-DGGE检测急性白血病儿童胸苷酸合成酶基因多态性研究
目的 胸苷酸合成酶(TS)足DNA合成的关键酶,在DNA合成与修复中起重要作用,是叶酸代谢循环中起中心作用的酶类之一,也是以5-氟尿嘧啶(5-FU)为基础化疗的靶酶,TS的遗传多态性在抗白血病等肿瘤疾病5-FU类药物的体内代谢中起着重要作用.该文研究胸苷酸合成酶基因编码区单核苷酸多态性(cSNP)及基因突变在急性白血病(AL)患儿和正常儿童中的分布情况,以探讨TS基因变异与AL患儿5-FU类药物化疗效应之间可能的相关性.方法 应用RT-PCR.变性梯度凝胶电泳(RT-PCR-DGGE)结合DNA直接测序技术,对53例AL患儿和115例正常儿童的cDNAs进行了TS基因cSNP及基凶突变的筛查与鉴定,分析各基因型在两组之间的分布差异.结果 首次鉴定了儿童TS 381 A>G(E127E)cSNP位点,其在AL患儿及正常儿童中的等位基因频率分别为12.3%,13.5%,与国际SNP文库中12.3%基本一致.该cSNP在两组人群的等位基因频率差异无显著性意义,与白血病的易感性无相关性.研究未发现T349C,G470T及CS00T变异.结论 采用RT-PCR-DGGE结合DNA测序法首次确定了儿章TS基因存在381 A>G cSNP位点,其等位基闪频率为13.1%,基因型分布频率在AL患儿及正常儿童两组人群中差异无显著性.
关键词： 胸苷酸合成酶基因 编码区单核苷酸多态性 变件梯度凝胶电泳 急性白血病 儿童
