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纯化病毒文献资料
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3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立
采用HSV1、HSV2和HCMV 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液,用冻融法、煮沸法、蛋白酶K法、NP40(乙基苯基聚乙二醇)法、综合法及改良通用法提取病毒DNA.综合法是将3种病毒细胞培养混合物各2ml,2500r/min离心10min,用2ml冷PBS缓冲液溶解沉淀,1200r/min离心5min,用1ml胰酶(0.25%)溶解沉淀,50℃保温18h,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25241),3000r/min离心10min,取水相加入1/2体积7.5mol/L的NH4(AC),2倍无水乙醇,-20℃放置30min,10000r/min离心10min,沉淀用70%乙醇洗涤,干燥,溶于50μl TE缓冲液.改良的通用法是在综合法基础上于提取前将病毒细胞液反复冻融3次,3000r/min离心40min纯化病毒;采用蛋白酶K(100μg/ml)38℃消化30min;4℃沉淀DNA时,18000r/ml离心20min;其余步骤同综合法.
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快速纯化甲型肝炎病毒及相关性状的检测
甲型肝炎病毒(HAV)在宿主细胞的胞浆内增殖,很少释放到细胞培养的上清液中,因此,给病毒的纯化带来一定困难.本实验室针对制备甲肝诊断试剂盒所需大量病毒抗原问题,对提高抗原的收获率、浓度和纯度等方法进行改良,建立了以冻融、超声,聚乙二醇(PEG)浓缩,蔗糖/甘油不连续密度梯度离心为主要步骤的快速纯化HAV的方法,并对得到的纯化病毒样品进行相关的性状检测.现将结果报告如下.
