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青蒿花粉变应原Art a1基因的克隆、表达及特性鉴定
目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Art al.方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Western blot和ELISA检测其IgE结合活性.结果选用阳性血清从青蒿花粉cDNA文库中筛选到1个阳性克隆,经序列测定,该基因与GenBank中已知基因无明显同源性,含有长度为609 bp的开放阅读框,编码203个氨基酸,命名为Art al;该重组变应原在大肠杆菌中高效表达为相对分子质量(Mr)为22.7×103蛋白,进一步在Ni2+亲和层析柱得到高度纯化;免疫学分析表明重组变应原有良好的IgE结合活性.结论本研究克隆和鉴定了一个青蒿花粉主要变应原Art al(登录号为:CK700713),为花粉过敏性疾病的诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础.
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艾蒿、青蒿花粉变应原组分的研究
目的对艾蒿、青蒿花粉变应原进行分离、鉴定.方法采用不同的提取方式得到艾蒿、青蒿花粉的粗浸液,通过饱和(NH4)2SO4分级沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量(Mr);采用Western-blotting鉴定2种花粉的主要及次要变应原.结果艾蒿、青蒿花粉分别分离到二十和十多种蛋白质组分.其中艾蒿花粉的组分中有9种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合,Mr为62000、43 000、38 000的蛋白条带的结合率高.青蒿花粉的组分中有11种蛋白能与患者血清中蒿属花粉特异性IgE结合,Mr为43000、38 000的蛋白条带结合率高.结论艾蒿花粉的主要变应原Mr分别为62 000、43000和38 000,青蒿花粉的主要变应原Mr分别为43000和38 000;2种花粉变应原组分存在很大相似性,但也有各自特异的变应原组分.
关键词： 青蒿花粉 艾蒿花粉 SDS-PAGE Western-blotting
