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大剂量百草枯致肺泡上皮A549细胞凋亡的研究
目的 通过大剂量百草枯诱导A549细胞的凋亡,观察上皮标记物E-cadherin、间质标记物α-SMA、凋亡指标caspase-8、caspase-3、caspase-9等的表达,探讨凋亡的可能机制.方法 先用不同剂量的百草枯(0.1 ～ 1.0 mmol/L)溶液与A549细胞共培养24h及48 h,观察细胞形态,MTT法分别测细胞存活率.后分别用0.1、0.2、0.3 mmol/L百草枯溶液与A549细胞共培养24h,行RT-PCR检测α-SMA、E-cadherin、caspase-8、caspase-3及caspase-9在不同浓度下的mRNA的表达量.然后用0.1、0.2、0.3 mmol/L百草枯溶液与A549细胞共培养24 h,行Western-blot检测α-SMA、E-cadherin、caspase-8、caspase-3及caspase-9的蛋白表达情况.结果 A549细胞与百草枯溶液共培养24h后,随着浓度的增加,细胞的存活率明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).培养48 h后,细胞存活率降低更为明显(P＜0.05).随百草枯浓度的增大和时间的延长,细胞形态学变化也更为显著.A549细胞与0.1、0.2和0.3 mmol/L浓度的百草枯共培养24 h.经RT-PCR及Western-blot检测,α-SMA及E-cadherin的mRNA表达量及蛋白表达量随浓度的增加而降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),而caspase-8、caspase-9、caspase-3的mRNA及蛋白表达量随浓度的增加而升高(P＜0.05).结论 短时间大剂量的百草枯中毒后,A549细胞的存活率明显降低,细胞形态发生显著变化,E-cadherin、α-SMA的表达量减少.而caspase-8以及下游因子caspase-9和caspase-3明显升高.
