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电针通过AKT/mTOR/P70S6K通路促进大鼠局灶脑缺血/再灌注大脑缺血皮质区血管再生的研究
目的:观察电针对大鼠局灶脑缺血/再灌注大脑缺血皮质区p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K表达及CD34+微血管密度变化的影响,探讨电针促进大脑缺血皮质区血管再生的机制.方法:140只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、模型+电针组(电针组)、模型+电针+哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)组(抑制剂组);采用线栓法制备SD大鼠右侧局灶脑缺血/再灌注模型,缺血2h后将假手术组、模型组、电针组和抑制剂组各分为再灌注12h、24h、48h、72h、7d五个亚组;取大鼠“百会”穴(GV 20)及左侧“四关”穴(合谷LI 4/太冲LR 3)为电针刺激穴位,刺激时间30min/次,每日1次,长持续7d;采用Western Blot检测各组大脑缺血皮质区磷酸化的蛋白激酶B(p-pro-tein kinase B,p-AKT)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、磷酸化的核糖体蛋白S6乳激酶(p-ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)蛋白的表达水平;免疫组化法检测大脑缺血皮质区VEGFR2蛋白、CD34+微血管血管的表达;Longa法检测神经功能.结果:与假手术组相比,模型组p-AKT蛋白的表达在24h、48h和72h增加(P＜0.05),模型组p-mTOR和p-P70S6K的蛋白表达在48h、72h和7d增加(P＜0.05),与模型组相比较,电针组各个时间点p-AKT、p-mTOR和p-P70S6K蛋白的表达均显著增加(P＜0.01),在RAPA的作用下,抑制剂组中各个时间点p-AKT、p-mTOR和p-P70S6K蛋白的表达明显低于电针组(P＜0.05);与模型组相比,电针组再灌注72h和7d大脑缺血皮质区VEGFR2蛋白、CD34+微血管的表达明显增多(P＜0.01),与电针组相比,抑制剂组再灌注72h和7d大脑缺血皮质区VEGFR2蛋白、CD34+血管减少(P＜0.05);与模型组和抑制剂组相比,电针组再灌注72h、7d神经功能评分明显改善(P＜0.05).结论:电针可提高大鼠局灶脑缺血/再灌注大脑缺血皮质区p-AKT、p-mTOR和p-P70S6K的表达,可能通过AKT/mTOR/P70S6K通路促进大鼠大脑缺血皮质区血管的再生和神经功能的恢复.
关键词： 电针 局灶脑缺血/再灌注 AKT/mTOR/P70S6K 血管再生 雷帕霉素 -
栀子苷对PDGF诱导的HSC-T6增殖活化的影响
目的探讨栀子苷抑制血小板衍生生长因子(PDGF)介导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的作用及其可能机制。方法培养 HSC-T6,体外给予不同浓度(20、50、100、200、400μg/ml)的栀子苷,通过MTT法检测细胞的活力；选取20、50、100μg/ml的栀子苷, PDGF刺激后,采用MTT、实时定量PCR( qRT-PCR)和Western blot 法检测细胞增殖和细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；进一步采用Western blot 法检测栀子苷对MAPK通路蛋白 P-ERK、P-p38和 Akt/mTOR/p70S6K 通路蛋白的表
达。结果栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖和减少活化标志物α-SMA的表达,并且明显抑制 Akt、mTOR和p70S6K的磷酸化水平,但是对ERK、p38活化水平无显著影响。结论栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖与活化,可能起到抗纤维化的作用,这一作用的产生可能与Akt/mTOR/p70S6K通路有关。关键词： 栀子苷 HSC-T6 肝纤维化 AKT/mTOR/P70S6K -
虎杖苷对K562细胞增殖及凋亡的影响
目的:观察虎杖苷对白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法:以不同浓度(0、5、10、20、40、80、160、320μmol/L)虎杖苷处理K562细胞12、24、48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率.另取对数生长期的K562细胞,分为3组,观察组加入80 μmol/L的虎杖苷,阴性对照组加入DMSO,空白对照组不处理,培养24 h后,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测p-Akt、p-mTOR、p70S6K、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平.结果:虎杖苷能有效抑制K562细胞增殖,呈时间和剂量依赖性(P＜0.001).80 μmol/L虎杖苷作用24 h后,K562细胞凋亡率增加(P＜0.001);细胞周期出现G0/G1期至S期的阻滞(P＜0.001);p-Akt、p-mTOR、p70S6K、Bcl-2蛋白表达永平下降(P＜0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:虎杖苷可有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,可能是通过抑制Akt/mTOR/p70S6K信号通路及调控相关凋亡蛋白的表达来实现的.
关键词： 虎杖苷 K562细胞 AKT/mTOR/P70S6K 凋亡
