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羟基磷灰石纳米颗粒/NR2B-siRNA复合物减轻小鼠福尔马林炎性痛
目的:观察羟基磷灰石纳米颗粒(hydroxyapatite nanoparticles,HA)/N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基(N-Methyl-D-aspartic Acid receptor 2B,NR2B)siRNA复合物(HA/NR2B-siRNA)鞘内转染对小鼠福尔马林炎性痛的影响及脊髓背角NR2B表达的变化,初步探讨HA作为NR2B-siRNA体内转染载体的可行性.方法:制备HA/NR2B-siRNA,检测HA对NR2B-siRNA的结合能力和稳定性.选18～20 g昆明小鼠48只,随机分六组(n=8):HANR组,PEINR组,HAGFP组,HA组,NS组,SO组.术后第7天,各组行福尔马林检测后,取腰段脊髓行NR2B免疫组化检测.结果:HA/NR2B-siRNA的佳质量比为35:1,在生理盐水重悬液中不解离.HN组和PN组的Ⅱ相痛行为显著减少(P＜0.05).HN组和PN组脊髓背角NR2B阳性细胞数明显减少(P＜0.05).结论:①HA能与NR2B-siRNA形成稳定的转染复合物;②鞘内注射HA/NR2B-siRNA能减少福尔马林致痛小鼠Ⅱ相痛行为并有效抑制脊髓背角NR2B的表达.
关键词： 炎性痛 NMDA受体2B亚基 小干扰RNA 小鼠 羟基磷灰石纳米颗粒 -
白藜芦醇甙对慢性酒精中毒大鼠学习记忆及前额叶皮质NR2B受体表达的影响
目的:研究白藜芒醇甙对慢性酒精中毒大鼠学习记忆及大脑前额叶皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)表达的影响.方法:建立大鼠慢性酒精中毒模型,Y-型迷宫测试空间学习与记忆成绩,免疫组织化学方法检测前额叶皮质NR2B表达,聚合酶链式反应(PCR)分析前额叶皮质NR2B mRNA的改变.结果:学习记忆测试显示模型组大鼠学习记忆成绩比正常组明显下降(P<0.01),各剂量组与模型组相比,学习记忆成绩明显上升(P<0.05或P<0.01):免疫组化结果表明模型组大鼠前额叶皮质区NR2B阳性表达较正常组明显增多,各剂量组与模型组相比,NR2B mBNA阳性表达明显减少;PCR结果表明模型组大鼠前额叶皮质区NR2B mRNA表达较正常组明显上升(P<0.01),各剂量组与模型组相比,NB2B mRNA表达明显下降,差异有显著性(P<0.01).结论:白藜芦醇甙可能通过对NMDA受体4F53亚基NR2B蛋白表达的调节而发挥抗酒精中毒作用.
关键词： 白藜芦醇甙 慢性酒精中毒 NMDA受体2B亚基 -
丁酸钠对大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基基因启动子区H3K9乙酰化的影响
目的 研究丁酸钠对Wistar大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基(NMDA receptor 2B subunit,NR2B)基因启动子区H3K9乙酰化表达的影响,探讨酒精觅药行为形成的表观遗传学机制.方法 48只雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组:生理盐水组、丁酸钠组、酒精组、丁酸钠酒精组,每组12只.采用腹腔注射的方法造模,采用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验评价大鼠的酒精觅药行为,采用Western-blot、实时荧光定量PCR、染色质免疫共沉淀技术分别检测4组大鼠海马NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化的表达水平.结果 4组大鼠CPP测试值、CPP分值组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组CPP测试值[(261.1± 102.2)s]、CPP分值[(48.5±94.6)s]相比,酒精组、丁酸钠酒精组CPP测试值[(406.8±109.2)s、(502.7±72.89)s]、CPP分值[(198.2±119.4)s、(277.5±76.2)s]均增加(P＜0.05),丁酸钠组CPP测试值[(193.4±93.8)s]、CPP分值[(9.7±94.0)s]差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组CPP测试值增加(P＜0.05).4组大鼠海马NR2B蛋白表达水平、NR2B mRNA表达水平、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组NR2B蛋白(1.00±0.28)、NR2BmRNA(1.00±0.14)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(1.00±0.25)表达水平相比,酒精组、丁酸钠酒精组NR2B蛋白[(1.40±0.34)、(1.79±0.30)]、NR2B mRNA[(1.26±0.16)、(1.50±0.08)]、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化[(1.68±0.16)、(2.35±0.45)]表达水平均增高(P＜0.05),丁酸钠组海马NR2B蛋白(0.85±0.24)、NR2B mRNA(1.05±0.13)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(0.96±0.41)表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平均增高(P＜0.05).CPP分值与NR2B蛋白表达水平(r=0.474,P＜0.05)、NR2B蛋白表达水平与NR2B mRNA表达水平(r=0.468,P＜0.05)、NR2B mRNA表达水平与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.596,P＜0.05)、CPP分值与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.542,P＜0.05)均呈正相关.结论 海马NR2B基因启动子区H3K9乙酰化可能是Wistar大鼠酒精觅药行为形成的表观遗传学机制之一,海马NR2B启动子区H3K9去乙酰化修饰可能是防治酒精依赖的一个新靶点.
关键词： 酒精 丁酸钠 组蛋白乙酰化 NMDA受体2B亚基 -
慢性酒精暴露后不同戒断时间点大鼠纹状体NMDA受体2B亚基表达的变化
目的 观察慢性酒精暴露后Wistar大鼠不同戒断时间点纹状体NMDA受体2B亚基(NMDA receptor 2B subunit,NR2B)表达的变化.方法 72只雄性Wistar大鼠,按照完全随机法分为戒断2h组、戒断6h组、戒断12h组、戒断1d组、戒断3d组和正常对照组,每组12只.5个戒断组大鼠自由饮用体积百分比为6％的酒精水溶液16周,正常对照组饮用纯净水16周.戒断组分别于末次饮酒后2h、6h、12h、1d、3d时,正常对照组于末次饮水后2h时,评估戒断症状后处死取纹状体,采用免疫荧光法和Western blot检测各组大鼠纹状体NR2B蛋白含量的表达,采用实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠纹状体NR2B mRNA的表达.结果 与正常对照组戒断评分[(1.50±0.80)分]相比,戒断2h、6h、12h、1d、3d组大鼠戒断评分[(10.42±2.50)分、(15.42±1.93)分、(9.25±2.01)分、(7.67±1.92)分、(2.25±0.87)分]均增高,戒断6h组评分高;与正常对照组大鼠纹状体NR2B荧光表达强度[(2210.00± 178.20)]、NR2B蛋白表达水平[(0.150±0.009)]及NR2B mRNA表达水平[(0.006±0.001)]相比,戒断2h、6h、12h、1d组NR2B荧光表达强度[(2710.56±194.21)、(5035.16±234.41)、(3326.23±378.16)、(2570.64±177.88)]、NR2B蛋白表达水平[(0.192±0.008)、(1.649±0.205)、(0.783±0.109)、(0.180±0.009)]及NR2BmRNA表达水平[(0.026±0.002)、(0.351±0.034)、(0.248±0.023)、(0.024±0.003)]均有明显增高(均P＜0.05),且随着戒断时间的延长,表达逐渐上升,至戒断6h达到高峰,其后开始下降,戒断3d恢复至基线水平(P＞0.05);戒断综合征评分与NR2B蛋白表达水平(r=0.719,P＜0.01)、NR2B蛋白表达水平与NR2B mRNA表达水平(r=0.937,P＜0.01)、NR2B mRNA表达水平与戒断综合征评分(r=0.673,P＜0.01)均呈正相关.结论 慢性酒精暴露后戒断大鼠前3d纹状体NR2B表达上调,NR2B蛋白和NR2B mRNA表达与戒断综合征评分呈正相关,调控NR2B表达可能是治疗酒依赖戒断症状的新靶点.
关键词： 纹状体 酒精 不同戒断时间点 NMDA受体2B亚基 -
基于多肽阵列技术构建的细胞穿膜肽靶向抑制炎性痛大鼠NR2B磷酸化
目的 我们已经基于多肽阵列技术构建了可以靶向抑制Fyn与PSD95相互作用的穿膜短肽FynP,本实验旨在验证Tat-LK15运载此短肽抑制炎性痛大鼠NMDA受体3B亚基(NR2B)磷酸化进而治疗炎性疼痛的可行性.方法 Tat-LK15与FynP短肽连接形成稳定的细胞穿膜肽Tat-LK15/FynP,乱序FynP作为对照(Tat-LK15/mFynP);然后检测腹腔注射Tat-LK15/FynP对完全弗氏佐剂(CFA)炎性痛模型大鼠脊髓背角(SCDH)Fyn与PSD-95的相互作用的影响,并且测定SCDH磷酸化NR2B(p-NR2B)表达水平的变化,另外测定腹腔注射此复合物后炎性痛大鼠机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射持续时间(TWL)的变化.结果 Tat-LK15/FynP注射后3 d,炎性痛模型大鼠SCDH Fyn与PSD-95的结合受到抑制,FynP及Tat-LK15/mFynP无此作用,炎性疼痛大鼠p-NR2B蛋白水平的表达下降51%(P<0.01),FynP及Tat-LK15/mFynP注射后p-NR2B后的表达无明显变化.Tat-LK15/FynP腹腔注射后3、7、14及21 d炎性痛大鼠的MWT显著增高,TWL显著缩短(P<0.01),FynP及Tat-LK15/mFynP无此治疗作用.结论 Tat-LK15可有效运载此短肽抑制慢性炎性痛大鼠Fyn与PSD95相互作用,从而抑制NR2B的磷酸化激活,进而对炎性疼痛大鼠具有治疗作用.
关键词： 多肽阵列技术 炎性疼痛 NMDA受体2B亚基
