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治疗型关节炎护膝对兔膝骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨OA护膝对兔膝骨性关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响.方法:6月龄兔54只,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,正常组常规饲养,模型组造模后常规饲养,对照组微波仪治疗,实验1组电(疏密波)治疗,实验2组热(热软膜),实验3组电热(OA护膝),治疗30 min,1次/d,连续治疗16周时处死,采用免疫组化检测软骨细胞增殖、凋亡.结果:16周时,关节软骨细胞凋亡率,各试验组明显高于正常组(P<0.01,P<0.05),对照组、实验1组和实验2组、实验3组明显低于模型组(P<0.01,P<0.05),实验3组明显低于对照组、实验1组和实验2组(P<0.05);关节软骨细胞增殖率,各试验组明显低于正常组(P<0.01,P<0.05),对照组、实验1组和实验2组、实验3组明显高于模型组(P<0.01,P<0.05),实验3组高于对照组、实验1组和实验2组(P<0.05).结论:OA护膝能有效促进关节软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡.
关键词： 骨关节炎 膝/病理生理学/治疗 软骨细胞/细胞学 细胞增殖 细胞凋亡 -
兔关节软骨细胞的体外培养及鉴定
目的 观察并鉴定体外单层培养的兔关节软骨细胞,分析其生物学特性.方法 取3周龄健康新西兰兔双侧膝关节及股骨头软骨,以机械分离与酶阶段消化分离相结合的方法获取软骨细胞,以DMEM高糖型培养基培养,待细胞达80%～90%融合时,以胰蛋白酶结合EDTA消化传代.逐日于倒置显微镜下观察和比较细胞形态,以四唑盐比色法绘制细胞生长曲线,分析细胞分化与生长能力,并采用组织学染色和ELISA的方法鉴定软骨细胞.结果 原代培养的兔关节软骨细胞约48～72 h贴壁,细胞形态多为小的梭形、纺锤形或三角形.传代细胞贴壁时间缩短,随传代次数增加,细胞形态逐渐向长梭形发展,而第1～3代细胞的胞形、生长与分化无显著变化.生长曲线显示,软骨细胞传代后经历典型的潜伏期、对数生长期和停滞期.H.E.染色、番红O染色及甲苯氨蓝染色细胞核被染成相应的蓝紫色、红色和蓝色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,细胞质被染成棕黄色,细胞核基本不着色.结论 成功进行了兔关节软骨细胞的体外培养,并发现体外单层培养的兔关节软骨细胞有去分化的趋势,而其第1～3代细胞生物学特性相对稳定,适合软骨组织工程研究之用.
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SV40LTAg基因永生化软骨细胞体外培养的生物学特性
目的探讨永生化关节软骨细胞体外培养的生物学特性.方法用SV40LTAg(类人猿40病毒大T抗原)基因转染原代培养的关节软骨细胞,构建永生化关节软骨细胞系(immortalized cartilage chondrocytes)并体外培养,以正常关节软骨细胞(normal cartilage chondrocytes)作对照.倒置显微镜下观察永生化软骨细胞的形态学变化和增殖情况;应用甲苯胺蓝、番红O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察永生化软骨细胞在培养过程中酸性粘多糖(GAG)和胶原分泌情况.结果永生化关节软骨细胞体外培养呈贴壁单层生长,长期传代(50代)仍有很强的增殖能力,形态呈现多角形和三角形,GAG和胶原染色均呈阳性.结论构建的永生化关节软骨细胞在体外培养能长期维持软骨细胞的特征性表型.
