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MMP-9在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨MMP-9在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 应用EnVisionTM二步染色免疫组化法,检测67例HCC手术切除的新鲜标本和16例正常肝组织中MMP-9的表达情况.利用鼠抗人MMP-9单克隆抗体对组织切片进行染色.应用x2检验,t检验和秩和检验,对MMP-9在HCC中的表达及其与临床病理特征的关系进行研究.结果 MMP-9在HCC组织中的阳性率明显高于正常肝组织(58.21％ vs 12.5％,x2=10.80,P＜0.01),MMP-9在有转移的HCC组织中表达的平均秩明显高于无转移的HCC组织中表达的平均秩(40.18 vs 26.38,P＜0.01).结论MMP-9在HCC组织中表达明显升高,有转移的HCC组织中MMP-9表达较无转移的HCC中明显升高,可能与它破坏靠近HCC细胞表面的细胞外基质和基底膜有关,进而促进HCC的侵袭与转移.
关键词： 基质金属蛋白酶9/分析 癌 肝细胞/代谢 肝细胞/病理学 -
葡萄糖转运蛋白1、缺氧诱导因子-1α和Ki-67在肝细胞癌中的表达及其相关性研究
目的 探讨葡萄糖转运蛋白1(Glut1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1 a)和Ki-67在肝细胞癌中的表达及其相关性。方法运用组织芯片技术，通过免疫组织化学Envision法检测171例肝细胞癌组织、55例癌旁组织、22例正常肝组织中Glut1、HIF-1α和Ki-67的表达情况，并结合临床病理因素进行分析。结果Glut1、HIF-1α和Ki-67在171例肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为15.2％、19.9％和66.1％，明显高于其在癌旁肝组织(1.8％、1.8％和5.5％)和正常肝组织(均阴性)中的表达率(P＜0.05)。Glut1和HIF-1α表达与肝细胞癌分化程度和TNM分期有关(P＜0.01，P＜0.05);Ki-67表达与肝细胞癌分化程度有关(P＜0.01)。肝细胞癌组织中Glut1与HIF-1α的表达呈正相关(r1 =0.553，P＜0.05);Glut1、HIF-1α与Ki-67均呈正相关(r2 =0.560，r3=0.613，P＜0.05)。结论Glut1、HIF-1 α和Ki-67在肝细胞癌的发生发展中起着不同程度的作用，联合检测Glut1、HIF-1α和Ki-67可能有助于判断肝细胞癌的恶性程度、转移潜能及预后分析。
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转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响
目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA(TGFβ1 siRNA)对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调(79±5)%和(55±4)%(均P<0.01);细胞增殖活性降低(25±4)%(P<0.01);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调(63±6)%和(57±4)%(均P<0.01);培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低(53±8)%和(46±8)%(均P<0.01).结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌.
关键词： 转化生长因子β1/遗传学/代谢 RNA 小分子干扰 肝细胞/代谢 -
TGFβRⅡ-siRNA表达质粒构建及干扰效应鉴定
目的 通过构建转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA(TGFβRⅡ-siRNA)的表达质粒,观察其在肝星状细胞中对TGFβRⅡ的表达抑制效果,为研究其阻断肝纤维化作准备.方法 根据Ambion公司网上设计软件设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilenc er2.1-U6质粒中,以脂质体Metafectene 2000转染HSC-T6细胞,利用RT-PCR法和western-blot分别检测对TGFβRⅡ mRNA和蛋白干扰效果.结果 表达针对TGFβRⅡ-siRNA的siRNA-a和siRNA-b二个质粒是成功构建;与对照组相比,其对TGFβRⅡ mRNA表达分别下调到0.89±0.06和0.25±0.03,对TGFβRⅡ蛋白表达分别下调到0.86±0.05和0.23±0.02,转染siRNA-b质粒组显著抑制TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达(均P<0.01),siRNA-a质粒组无统计学意义(均P>0.05).结论 TGFβRⅡ-siRNA能明显抑制TGFβRⅡ的表达.
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HBx蛋白促进纤维化相关因子在人肝星状细胞中的表达
与QSG7701、QSG7701-pcDNA3和QSG7701-HBx细胞共培养的上清液Col Ⅰ,其浓度分别为(191.2±20.8)ng/ml、(200.2±21.6)ng/ml和(500.5±43.4)ng/ml,QSG7701-HBx明显高于两对照组(P<0.05),这表明HBx蛋白能促进LX-2细胞分泌Col Ⅰ,有助于肝纤维化的形成.结论 与QSG7701-HBx细胞共培养后,肝星状细胞中的纤维化相关蛋白表达明显增强,体外实验证实HBx具有诱导肝纤维化的作用.
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原发性肝细胞癌患者巨噬细胞移动抑制因子血清表达水平及其临床意义
目的 探讨原发性肝癌患者巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的水平及其临床意义.方法 应用ELISA法检测79例原发性肝癌患者、35例慢性乙肝患者和30例健康对照者MIF水平,并对比分析.结果 原发性肝细胞癌组、乙型肝炎组和健康对照组血清中MIF水平分别是(42.3±13.6)ng/ml,(20.3±9.2)ng/ml和(18.3±8.5)ng/ml.原发性肝癌组MIF表达水平高于乙型肝炎组和健康对照组(P<0.01).MIF的水平与分期、肿瘤大小、是否转移和组织分化程度有关.结论 血清MIF可能与原发性肝癌发展相关,其有望成为一个有用的辅助诊断原发性肝细胞癌的生物标志.
关键词： 癌 肝细胞/代谢 巨噬细胞游走抑制因子/代谢 -
氯胺酮对脓毒症大鼠肝细胞能量代谢的影响及其机制
目的:探讨氯胺酮对脓毒症大鼠肝线粒体的保护机制.方法:采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒症模型,将大鼠随机分为假手术组(C组)、盐水组(NS组)、氯胺酮组(K组),模型制作12h开始分别给予盐水和氯胺酮,在给药前和给药4h后分别取静脉血,并在给药4h后制备肝线粒体和组织匀浆,分别采用Clark氧电极技术测定线粒体呼吸功能,ELISA法检测IL-1β和IL-6,分光光度法测定NO水平.结果:尽管K组的RCR 和ADP/O明显低于C组,NO、给药前后IL-1β和IL-6水平明显皆高于C组;但与NS组比较,K组RCR 和ADP/O升高,NO、给药4h后的IL-1β和IL-6水平降低.结论:氯胺酮能通过降低IL-1β和IL-6水平,减少肝组织NO的产生,保护线粒体呼吸功能.
