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苦参碱抑制HepG2增殖时Ca2+等生化指标的变化
目的:研究苦参碱抑制HepG2细胞增殖时相关生化指标的变化,有助于认识苦参碱抗肿瘤的机制.方法: 一定浓度苦参碱处理HepG2细胞,Fluo-3/AM荧光染色,荧光显微镜观察细胞内Ca2+浓度变化;免疫细胞化学和放免法检测AFP、PCNA、cAMP、cGMP的改变;亲和层析法分离肝癌GGT(HSGGT),酶动力法检测HSGGT和GGT酶活性.结果:苦参碱抑制HepG2细胞增殖时,胞内Ca2+浓度升高;反应细胞生长抑制的指标-cAMP升高,cAMP/cGMP比值升高.反应细胞增殖的生化指标-AFP、PCNA、cGMP、GGT、HSGGT量均降低.结论:苦参碱抑制HepG2细胞增殖时,相关生化指标均发生了改变,这可能与苦参碱抗肿瘤的机制有关.
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原发性肝癌临床病理学新趋势
原发性肝癌(简称肝癌)临床病理学研究发展迅速,尤其是日本. 自20世纪60年代开始建立了日本肝癌研究会,每2 a汇总日本全国医院临床病理学资料.
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端粒酶在原发性肝癌中的表达
1材料和方法1.1材料手术切除PHC 38例,男26例,女12例,年龄32岁～71岁,平均47.4岁,术前均未放疗,标本均于离体后数小时内采集,液氮速冻后,转至-80℃冰箱贮存备用,所有病例均经病理证实.
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肝硬化肝癌Ⅳ型胶原酶的表达
基质的酶类中基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinase,MMP)是主要的直接作用者[1],而其中的Ⅳ型胶原酶(包括MMP-2和MMP-9)与肿瘤侵袭转移的关系为密切[2].因为,Ⅳ型胶原酶不但可以酶解细胞间基质成分还能酶解基底膜主要成分Ⅳ型胶原[3].已有大量研究显示,Ⅳ型胶原酶与多种肿瘤的侵袭转移有关[4,5,11].另有研究报道,MMP-2与肝硬变的发生、进展密切相关[6].然而,Ⅳ型胶原酶与合并肝硬变的肝细胞癌(HCC)的关系,目前国内外研究罕见报道.我们采用免疫组化SABC法,并应用图象分析法进行定量分析31例手术切除的肝细胞癌标本MMP-9,MMP-2的变化,并对其进行统计学分析,以揭示Ⅳ型胶原酶与合并肝硬变的HCC之间的关系
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肝细胞癌中Fas/FasL表达的意义
目的研究肝细胞癌组织及其癌旁非癌肝组织中Fas/FasL(Fas ligand)的表达情况及其与临床病理的关系方法应用免疫组化Envision和RT-PCR双重方法检测30例原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的癌组织及其癌旁非癌肝组织的Fas蛋白和FasL的mRNA及其蛋白的表达情况.结果 12例(12/30,40.0%)HCC表达Fas蛋白,明显低于癌旁组织(21/30,70.0%,P＜0.05).21例(21/30,70.0%)HCC的FasL蛋白为阳性,略高于癌旁组织(17/30,56.7%),两者无显著性差别,但HCC的FasL mRNA水平较癌旁组织为高(70.1/32.2,P＜0.05),且同一癌组织多呈Fas-FasL+表型(16/30,53.3%),癌组织Fas与FasL表达显著相关.HOC中Fas蛋白的表达与其组织学分级、癌周侵袭程度及肿瘤包膜有关(1/3/7/1,4/12,1/4/7,P＜0.05),而FasL蛋白的表达与其临床病理指标无明显关系(0/2/16/3,7/21,5/13/3,P＞0.05)结论肝癌可能通过下调Fas、增强FasL的表达实现免疫逃避;而Fas的表达对辅助判断肝癌的侵袭转移乃至预后可能有重要意义.
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二乙基亚硝胺诱发大鼠肝细胞癌发生过程中基质金属蛋白酶动态变化
目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)在肝细胞癌形成过程中动态变化及作用.方法采用二乙基亚硝胺(DENA)诱癌建立大鼠肝癌模型.应用明胶酶谱法测定诱癌过程中癌变发生的三个阶段6个时相肝组织中MMP-2和MMP-9的表达及活性.结果肝癌发生过程中基质金属蛋白酶呈持续升高的趋势,至早期癌变期及肿瘤演进期(16 wk～24 wk)MMP-2,MMP-9的表达呈一个较高的平台(分别为167350±20436和237754±32675),且发现MMP-2的活性形式表达显著增加.结论 MMPs的表达不同与肝星状细胞的激活和肝细胞癌形成有关,而与肿瘤的结节数及大小无关.
关键词： 癌 肝细胞/病理学 基质金属蛋白酶/分析 二乙基亚硝胺/药理学 疾病模型 动物 肝肿瘤 实验性/病理学 -
KAll基因在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及其意义
目的研究转移抑制基因KAIl在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及该基因与肝细胞癌患者临床资料间的关系.方法采用Northern blot方法研究20例肝细胞癌组织、14例肝硬化组织和10例正常肝组织中KAll基因mRNA的表达水平,经mRNA的定量分析及统计处理判定KAIl基因与肝细胞癌患者临床特征的关系.结果肝硬化和肝细胞癌组织中KAll mRNA表达水平(0.113±0.110;0.139±0 078)显著低于正常肝组织中的表达(0.316±0.121),(P=0.0003;P=0.0000);肝硬化和肝细胞癌组织中KAll基因mRNA的表达无显著差异(p=0.4152);KAIlmRNA在不同分化程度的肝细胞癌组织中的表达无显著差异(P=0.8261),而Ⅲ期肝细胞癌组织中的KAll基因表达显著低于Ⅱ期的肝细胞癌组织(P=0.0221)结论转移抑制基因KAI1在肝硬化阶段亦有低表达;肝癌组织中KAI1基因的低表达与肝癌的转移有关.
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层粘蛋白在人原发性肝细胞癌转移中的意义
目的了解层粘蛋白(LN)在原发性肝细胞癌(HCC)转移中的作用和价值.方法应用放射免疫分析法(RIA)、免疫组化和图象分析分别对12例HCC有转移者和12例HCC无转移者血清和癌组织中LN进行测定,并进行相关分析.结果 HCC有转移组患者血清中LN含量(μg/L)178±32,显著高于HCC无转移组140±23(P＜0.01). HCC有转移组患者组织中LN平均A (OD值)为0.17±0.06,显著低于HCC无转移组0.26±0.05(P＜0.01). 组织中LN与血清LN含量成明显的负相关关系. 免疫组化结果显示,LN不仅存在于间质中,还存在于癌细胞中;LN亦可排列成窦状,尤以HCC转移者组织中为明显.结论 LN在HCC转移过程中具有双重作用,血清LN含量升高可作为衡量HCC转移的一个简便而有用的指标.
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生长因子受体反义基因逆转肝癌细胞的恶性表型
目的应用反义技术原理将生长因子受体反义基因,导入人肝癌SMMC-7721细胞,阻断肝癌细胞生长因子与其受体的相互作用,研究其对肝癌细胞恶性表型的逆转作用.方法构建人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(IGF-ⅡR)正、反义基因重组真核表达质粒,用磷酸钙-DNA共沉淀方法转染人肝癌细胞株SMMC-7721,经G418培养基筛选得到稳定的抗性细胞.采用Northern杂交检测反义基因转染细胞内源性IGFⅡR基因mRNA转录的抑制,同时观察转染细胞克隆形成率,细胞生长曲线和软琼脂生长能力的变化.结果 IGF-ⅡR反义基因转染后,肝癌细胞的内源性IGF-ⅡR基因mRNA转录受到有效抑制;各组转染细胞克隆形成率分别为:空载体组22.0±3.6,正义组13.3±2.1,反义组4.3±2.1,反义基因转染细胞克隆形成率明显降低;软琼脂培养基细胞集落形成数为:SMMC-7721组254.8±15.9,空载体组196.4±30.4,正义组99.4±23.0,反义组0.0±0.0,说明反义基因转染细胞失去在软琼脂上生长的能力;但细胞生长曲线无明显变化.结论应用反义策略干扰肝癌细胞生长因子受体基因的异常高表达状态,可以有效阻断配体与受体间作用的生长刺激信号环路,一定程度地抑制肝癌细胞的恶性表型.
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组织蛋白酶D和嗜铬颗粒素A在人原发性肝细胞癌的表达意义
目的探讨组织蛋白酶D和嗜铬颗粒素A在人原发性肝细胞癌(HCC)的表达及其意义.方法免疫荧光双标记染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜观察HCC 85例.结果组织蛋白酶D在正常肝细胞有弱表达,但在HCC组织,组织蛋白酶D的表达显著增强,而且癌细胞荧光染色强度存在区域性差别,通常临床恶性程度越高、肿瘤分化越差,荧光染色较强的癌细胞越多. HCC的组织学分级越高,组织蛋白酶D的表达越多. 85例HCC中有71例癌细胞呈组织蛋白酶D强阳性,阳性率83.5%. 在组织学分级为3～4级的28例中,组织蛋白酶D阳性的占26例(阳性率92.9%);组织学分级为2级的53例中,有46例阳性(阳性率86.8%);而组织学分级为1级的4例中,仅有1例阳性(阳性率25.0%). 组织蛋白酶D阳性细胞的分布,在组织学分级不同的HCC中有明显差别(P＜0.01). 我们还发现组织蛋白酶D的表达与患者年龄无明显关系. 有组织蛋白酶D表达的患者平均年龄为51.2岁±2.8岁(32岁～68岁),无组织蛋白酶D表达的患者平均年龄为51.2岁±4.5岁(28岁～71岁)(P＞0.05). 组织学分级为1级的HCC CgA阳性率为75.0%(3/4),2级的阳性率71.7%(38/53),3～4级的阳性率为71.4%(20/28). 经统计学分析表明,CgA阳性细胞的分布,在组织学分级不同的HCC没有明显差别(P＞0.05). 免疫荧光双标记显示,在大部分癌组织中,二者同时表达. 结果提示HCC的癌细胞对组织蛋白酶D的加工出现障碍,因此组织蛋白酶D在细胞中积聚. 由于组织蛋白酶D的蛋白水解酶活性和自分泌性丝裂原活性,因此组织蛋白酶D的表达增加可能在肿瘤的浸润和转移中有一定作用. 这些发现表明组织蛋白酶D对HCC有预后诊断价值.结论组织蛋白酶D和CgA在绝大部分HCC都可同时表达. 也提示肝癌细胞中组织蛋白酶D可能与CgA的加工有关. 因为其潜在的临床应用价值,组织蛋白酶D在HCC表达显然是值得进一步研究的课题.
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肝癌中cyclinD1扩增与HBV感染及病理学的关系
目的探讨癌基因 cyclin D1在肝癌发生发展中的作用以及与HBV感染和临床病理之间的关系.方法取手术切除的肝细胞癌标本,用Southern杂交的方法对cyclin D1和CDK4癌基因以及HBV的感染状态进行了检测,切片同时行病理检查.结果肝癌39例中9例cyclin D1存在2～30倍的扩增(23.7%),其中1例检出重组杂交带;37例中5例(13.5%)有CDK4的扩增;HBV DNA在肝癌组织中检出的阳性率为94.7%,HBV DNA整合率为74.4%. 相关分析发现,cyclin D1的扩增与CDK4扩增,HBV DNA整合,肿瘤的分化高低和肿块大小等之间有相关关系,相关系数r分别为0.51,0.31,0.39和0.55,全部P＜0.05.结论 cyclin D1的扩增与HBV DNA的整合密切相关,并在肝癌的恶化进展中起着重要作用.
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肝组织和外周血中AFPmRNA定量分析及临床应用的研究
目的:通过检测AFP mRNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者肝组织和外周血中的基因表达,探讨AFP mRNA相对定量值作为HCC微转移指标的可能性,建立HCCAFP mRNA相对定量分析法.方法:建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系(Nested-RT-PCR),对肝组织和外周血中的AFP mRNA进行相对定量值分析.结果:在49例HCC及其癌旁和远癌组织、12例非肝肿瘤组织和8例正常肝组织中AFP mRNA相对定量值阳性分别为35例(71.4%)、20例(40.8%)、3例(6.1%)、0例、0例;35例肝癌患者中有23例术前外周血AFP mRNA相对定量值为阳性(657%),明显高于肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎患者和正常人外周血;HCC患者外周血术后72 h AFP mRNA相对定量值的阳性率22.9%(8/35),与术前比较差异有统计学意义,P<0.01.结论:肝组织和外周血中AFP mRNA相对定量分析可提高HCC阳性诊断率,并可作为HCC微转移的早期检测指标.治疗前后的变化对指导临床治疗及评价HCC治疗效果有重要参考价值.
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D-氨基葡萄糖衍生物抑制HepG2细胞生长及诱导凋亡的初步研究
目的:研究D-葡萄糖衍生物对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响,进而探讨D-葡萄糖衍生物诱导HepG2细胞凋亡的作用.方法:用不同浓度的D-葡萄糖衍生物处理HepG2,采用MTT法测定其对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,通过荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的形态结构及其对HepG2细胞诱导凋亡的效应.结果:D-氨基葡萄糖衍生物能抑制HepG2细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;D-氨基葡萄糖衍生物能诱导肝癌细胞凋亡;荧光显微镜、透射电镜可见肝癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰.结论:D-氨基葡萄糖衍生物在体外可显著抑制人肝癌细胞株生长,其作用机制主要是诱导肿瘤细胞凋亡.
关键词： 癌 肝细胞/病理学 葡萄糖/类似物和衍生物 细胞凋亡 -
PCNA和nm23-H1在原发性肝癌中的表达及意义
目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和抗癌基因nm23-H1蛋白产物与原发性肝癌的关系.方法:用LSAB免疫组化法对41例原发性肝癌组织PCNA和nm23-H1蛋白产物进行检测.结果:肿瘤组织的分化程度愈低,PCNA表达愈强,Ⅱ级以上的肿瘤表达强度100%.nm23-H1则相反,Ⅰ级66%阳性,Ⅱ级以上为14.6%.结论:PCNA的表达强度可作为原发性肝癌的分级指标之一.nm23-H1的表达有助于了解肝癌的生物学行为和判断预后.
关键词： 肝肿瘤/病理学 癌 肝细胞/病理学 增殖细胞核抗原/生物合成 -
肝细胞癌中血管内皮生长因子及其受体的表达与意义
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEG-FRs)在肝细胞癌(HCC)肿瘤血管生成中的调节作用.方法:采用免疫组化法检测39例(男34例,女5例)共41个经手术病理证实的HCC病灶VEGF、Flt-1和KDR/Flk-1的蛋白表达.观察病灶肿瘤大小、包膜、子灶、门静脉癌栓、肝门淋巴结转移和肝硬化等.记录HCC患者的临床资料,如年龄、HBsAg、HBV和AFP情况.手术结果记录病灶大小、数目、肝硬化和包膜情况.病理结果记录病理分级、肝硬化等情况.结果:在转移高危组、包膜欠完整和(或)无包膜组、小肝癌组中VEGF表达阳性率均高于转移低危组、包膜完整组和大肝癌组,差异有统计学意义,P<0.05.而VEGF的表达与Edmondson分级、HBV、HBsAg、AFP水平以及肝硬化之间差异均无统计学意义,P>0.05.KDR/Flk-1表达阳性病灶29个,阳性率为70.73%(29/41);KDR/lk-1在转移高危组、包膜欠完整和(或)无包膜组、小肝癌组中表达的阳性率也均高于转移低危组、包膜完整组和大肝癌组,差异有统计学意义,P<0.05.KDR/Flk-1蛋白的表达亦与Edmondson分级、HBV、HBsAg、AFP水平、肝硬化之间差异无统计学意义,P>0.05.Flt-1阳性病灶28个,阳性率为68.29%(28/41);Flt-1的表达与转移、包膜情况、肿瘤大小以及Edmondson分级、HBV、HBsAg、AFP水平、肝硬化之间差异均无统计学意义,P>0.05.结果显示VEGF的表达与KDR/Flk1-存在相关性,P<0.001;而VEGF表达与Flt-1及KDR/Flk1的表达与Flt-1的表达无相关性,P>0.05.结论:VEGF通过结合其特异性酪氨酸激酶受体,特别是受体KDR/Flk-1促进HCC肿瘤血管生成因子而促进HCC的生长、浸润和转移.
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利用中效原理观察抗癌药物的相互作用
目的:利用中效原理体外定量分析抗癌药物苦参素、5-氟尿嘧啶联合应用对人肝癌细胞株(HepG2)的相互作用.方法:采用MTT法及中效原理判断联合用药的效果.结果:两种药物单独及联合应用时随着药物剂量增加,其效应也增加.当fa=0.41时,CI=1,两药作用相加;fa<0.41时,CI<1,两药为协同作用;fa>0.41时,CI>1,两药拮抗.两药合用时给药时间先后次序不同,合用效应差异无显著意义,而合用时药物浓度比例变化能够影响合用效应.结论:两种药物合用小剂量为协同,大剂量是拮抗,其效应大小与药物浓度比例有关,而与给药时间先后次序无关.
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肝细胞癌组织中endoglin(CD105)和VEGF及p57kip2表达与预后的关系
目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)endoglin (CD105)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和有丝分裂抑制因子(p57kip2)的表达与组织形态学和自然病程的关系.方法:SP法检测143例资料完整的HCC中63例获访者肝癌组织和20例非肝癌肝组织中endoglin (CD105)、VEGF和p57kip2的表达.结果:肝癌组织endoglin(CD105)、VEGF和p57kip2免疫组化阳性率分别为68.3%(43/63)、73.0%(46/63)和68.3%(43/63),显著高于癌旁组织及非癌肝组织,P=0.000 0.癌组织分化与VEGF、endoglin (CD105)和p57kip2表达差异无统计学意义(P值分别为0.097 8、0.139 3和0.839 7).endoglin (CD105)、VEGF和p57kip2表达不同,患者的生存时间有差别(P值分别为0.001 3、0.003 9和0.000 8),endoglin (CD105)和VEGF高表达,可能预示预后较差,而p57kip2高表达可能预示预后较好.p57kip2表达与endoglin(CD105)和VEGF表达呈负相关,r's值分别为-0.357 2和-0.272 5.结论:endoglin(CD105)、VEGF蛋白的过度表达和p57kip2丢失可能与肝癌的发展及预后有关.
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PTEN基因在肝细胞肝癌中的表达及其意义
目的:研究PTEN基因在肝细胞肝癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:应用免疫组化(SP法)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例HCC及对应癌旁组织中PTEN蛋白及PTEN mRNA的表达情况,分析PTEN基因的表达与HCC临床病理参数的关系.结果:PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞质内.PTEN mRNA和PTEN蛋白在HCC中的阳性率分别为41.38%(24/58)、44.83%(26/58),明显低于癌旁肝组织的阳性率100%(58/58),差异具有统计学意义,P＜0.01.统计学分析显示,在HCC中PTEN基因的低表达与肿瘤分期分级、门静脉有无癌栓、血清中甲胎蛋白表达水平、是否合并HBV感染等有关,P＜0.05,与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无关.结论:PTEN基因可能在HCC的发生发展中起着重要作用,其表达有望成为HCC的重要分子生物学指标.
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肝细胞癌组织中抑癌基因PTEN与pAkt的表达及其相关性研究
目的:研究第10号染色体上缺失的抑癌基因与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(phosphatase andtensin homlog deleted on chromosome ten protein,PTEN)与磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(phospho-serine/threonine protein kinase B,pAkt)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中蛋白的表达、意义及两者相关性.方法:采用免疫组织化学法检测71例HCC及癌旁组织中PTEN和pAkt的表达.结果:1)HCC中PTEN蛋白阳性率(36.6%,26/71)明显低于癌旁肝组织(93.0%,66/71),P=0.000,且随HCC恶性程度升高而显著下降;2)pAkt在HCC中表达率(80.3%,57/71)明显高于癌旁肝组织(29.6%,21/71),P=0.000,且其表达率随HCC恶性程度升高而增加;3)HCC中PTEN与pAkt表达呈负相关,r=-0.307,P=0.009.结论:PTEN蛋白低表达不能有效抑制pAkt异常激活,从而对HCC发生、发展起重要作用.
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血管内皮生长因子与抑癌基因PTEN在肝细胞癌组织中表达及临床意义
目的:观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(phosphatase and tensin homlog deleted on chromosome ten protein,PTEN)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达及其关系,并探讨两者与HCC发生、发展及肿瘤侵袭性的关系.方法:采用免疫组织化学链霉素亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例HCC及癌旁组织中PTEN与VEGF蛋白及mRNA表达和微血管密度(microvessel density,MVD),并进一步分析它们之间的相关性及其与肝癌组织临床病理分期、侵袭性的关系.结果:HCC中PTEN蛋白及mRNA表达阳性强度明显低于癌旁组织,而VEGF阳性表达强度明显高于癌旁组织,且两者间呈负相关(r=-0.613、-0.572, P=0.000、0.002);肝癌组织分化程度、侵袭性与PTEN表达呈负相关(P=0.02、0.000),而与VEGF和MVD表达呈正相关(P=0.000);MVD与PTEN表达呈负相关(r=-0.439,P=0.001),而与VEGF表达呈正相关(r=0.645,P=0.000).结论:PTEN和VEGF表达水平一定程度上能反映HCC组织分化和侵袭性强弱;HCC中PTEN表达缺失可能引起VEGF表达增加,从而在肿瘤侵袭、转移中发挥一定作用.
