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头穴针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内TGF-β1mRNA表达的调节
目的:观察头穴针刺治疗急性脑缺血的机理.方法:采用大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交方法观察脑缺血再灌注时TGF-β1mRNA表达的变化及针刺对TGF-β1 mRNA表达的影响,同时测定了脑梗死体积.结果:假手术组大鼠TGF-β1mRNA在皮层、纹状体呈基础水平表达,脑缺血再灌注后24 hTGF-β1mRNA表达增强,针刺可明显缩小梗死的体积,明显增强皮层TGF-β1mRNA的表达.结论:针刺对缺血性脑损伤的保护作用机制可能与针刺增强脑内TGF-β1mRNA的表达有关.
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结直肠癌组织COX-2 mRNA表达的临床病理意义
目的检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA在结直肠癌、癌旁及正常组织中的表达情况.探讨其表达与临床病理特征的关系.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测24例结直肠癌、癌旁和正常组织中COX-2的mRNA表达.结果 24例结直肠癌中,COX-2 mRNA表达阳性者17例,癌旁和正常组织阳性者分别为9例和3例,癌组织中的表达率明显高于癌旁和正常组织(P＜0.01);COX-2 mRNA的阳性表达与结直肠癌的淋巴结转移、远处转移、Duke′s分期呈正相关.结论结直肠癌组织中COX-2 mRNA表达水平高于癌旁和正常组织,其表达与结直肠癌侵袭转移密切相关.因此COX-2mRNA可作为预测结直肠癌细胞转移潜能的敏感指标.
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食管癌组织中CD44v6基因转录表达意义
目的探讨CD44v6 mRNA及其蛋白表达与食管癌病理生物学行为的关系,为观测食管癌侵袭转移潜能和评估胃癌患者预后寻求一个新的客观生物学指标.方法应用CSA法原位杂交和免疫组化技术,检测65例食管癌组织中CD44v6 mRNA及其蛋白表达,并结合肿瘤的病理生物学行为和临床随访资料分析.结果在食管癌中CD44v6 mRNA和其蛋白表达阳性率分别为61.5%(40/65)和58.5%(38/65),其表达均与食管癌浸润,淋巴结转移和预后密切相关(P＜0.05).结论检测CD44v6表达可作为预测食管癌转移潜能和评估患者预后的一个新的生物学指标.
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肝细胞癌中Fas/FasL表达的意义
目的研究肝细胞癌组织及其癌旁非癌肝组织中Fas/FasL(Fas ligand)的表达情况及其与临床病理的关系方法应用免疫组化Envision和RT-PCR双重方法检测30例原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的癌组织及其癌旁非癌肝组织的Fas蛋白和FasL的mRNA及其蛋白的表达情况.结果 12例(12/30,40.0%)HCC表达Fas蛋白,明显低于癌旁组织(21/30,70.0%,P＜0.05).21例(21/30,70.0%)HCC的FasL蛋白为阳性,略高于癌旁组织(17/30,56.7%),两者无显著性差别,但HCC的FasL mRNA水平较癌旁组织为高(70.1/32.2,P＜0.05),且同一癌组织多呈Fas-FasL+表型(16/30,53.3%),癌组织Fas与FasL表达显著相关.HOC中Fas蛋白的表达与其组织学分级、癌周侵袭程度及肿瘤包膜有关(1/3/7/1,4/12,1/4/7,P＜0.05),而FasL蛋白的表达与其临床病理指标无明显关系(0/2/16/3,7/21,5/13/3,P＞0.05)结论肝癌可能通过下调Fas、增强FasL的表达实现免疫逃避;而Fas的表达对辅助判断肝癌的侵袭转移乃至预后可能有重要意义.
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大鼠小肠粘膜损伤修复过程中肠段细胞因子的表达
目的探讨部分细胞因子在大鼠小肠粘膜损伤的修复过程中的作用.方法首先用巴西日圆线虫感染大鼠,建立肠粘膜损伤与修复模型,采集建模后4,8,12,16,20 d的小肠组织标本,运用定量反转录PCR技术进行IL-2,3,4,5,10,TGF-α与TGF-β表达水平的检测,以β-actin作内参照,扫描所得A(OD值)与β-actin A(OD值)比值为结果值.其次,在感染巴西日圆线虫同时,分别向感染巴西日圆线虫大鼠转输大鼠肠道固有膜淋巴细胞和该淋巴细胞培养上清,同样方法检测不同时间段肠段各细胞因子的表达.结果①大鼠感染巴西日圆线虫后4,8,12,16,20 d的细胞因子表达水平分别为:IL-2:3.07,2.84,3.33,3.24,3.85;IL-3:6.02,5.13,3.54,2.20,1.98;IL-4为:0.25,0.26,0.18,0.17,0.15;IL-5为:0.16,0.16,0.07,0.05,0.05;IL-10:6.25,6.87,7.44,7.32,6.45;IFNγ:7.43,6.24,7.28,15.42,7.82;TGF-α:3.70,10.09,6.94,4.88,4.01;TGF-β:4.14,15.76,10.66,5.25,4.55;②感染巴西日圆线虫大鼠,传输淋巴细胞后4,8,12,16,20 d的细胞因子表达水平为:IL-2:3.70,3.99,4.24,3.86,2.90;IL-3:3.45,3.78,4.46,3.99,3.25;IL-4:0.15,0.24,0.25,0.22,0.15;IL-5:0.16,0.16,0.06,0.07,0.05;IL-10:5.29,5.38,6.59,7.33,4.88;IFN-γ:3.24,3.39,3.78,3.42,3.02;TGF-α:3.99,14.54,10.33,6.29,4.01;TGF-β:5.14,16.26,15.74,10.83,6.98;③感染巴西日圆线虫大鼠,传输淋巴细胞培养上清治疗后4,8,12,16,20 d的细胞因子表达水平为:IL-2:4.82,5.76,5.78,5.69,4.42;IL-3:2.99,4.04,3.21,3.38,2.57;IL-4:0.32,0.40,0.48,0.23,0.19;IL-5:0.22,0.22,0.18,0.13,0.11;IL-10:6.44,6.38,6.57,6.33,5.81;IFN-γ:3.24,3.09,3.11,2.70,2.97;TGF-α:4.09,14.55,11.33,8.21,6.58;TGF-β:5.24,16.60,13.84,9.24,7.01.结论随着大鼠肠粘膜损伤的发生,IL-2 mRNA的表达渐有增加,感染Nb后7 d～10 d达到高峰,在损伤修复过程中表达水平变化无显著差异;IL-10的表达在粘膜炎症严重时稍有增加,在修复过程中表达水平无显著差异;肠粘膜损伤后修复过程中,IL-3,IL-4,IL-5的mRNA的表达均有升高,TGF-α,TGF-β表达水平显著升高.这些细胞因子在肠粘膜损伤修复过程中作用不同.感染Nb、转输大鼠肠道固有膜淋巴细胞和该淋巴细胞培养上清后,各细胞因子表达无显著化.
关键词： 小肠/病理学 肠粘膜/病理学 细胞活素类/生物合成 RNA 信使/生物合成 -
蛋白翻译起始因子C2在原发性肝细胞肝癌中表达的涡义
目的研究C2mRNA及其蛋白在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达及意义方法用原位杂交检测C2mRNA在2l例HCC及其癌旁组织中的表达,ABC免疫组化法检测G2蛋白在60例HCC及其42例癌旁组织中的表达,Western blot法检测C2蛋白在HCC及其癌旁组织中的表达.结果21例HCC及其癌旁组织中,G2 mRNA阳性率分别占23.8%(5/21)和85.7%(18/21).60例HCC及42例癌旁组织中,G2蛋白阳性分别占27.3%(17/60)和83.3%(35/42)27例肝硬变中,C2蛋白阳性率为77.8%(21/27).x2检验:C2mRNA及其蛋白在HCC癌旁组织中表达明显高于癌组织(P＜0.001);C2蛋白在肝硬变中的表达明显高于HCC癌组织(P＜0.01);C2的表达与患者年龄、HBsAg及AFP有明显关系(P＜0.05);而与癌组织的分化程度、肿瘤大小、淋巴转移无关;Western blot与免疫组化结果一致结论 C2基因表达下凋可能与HCC的发生、发展及早期诊断有关
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KAll基因在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及其意义
目的研究转移抑制基因KAIl在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及该基因与肝细胞癌患者临床资料间的关系.方法采用Northern blot方法研究20例肝细胞癌组织、14例肝硬化组织和10例正常肝组织中KAll基因mRNA的表达水平,经mRNA的定量分析及统计处理判定KAIl基因与肝细胞癌患者临床特征的关系.结果肝硬化和肝细胞癌组织中KAll mRNA表达水平(0.113±0.110;0.139±0 078)显著低于正常肝组织中的表达(0.316±0.121),(P=0.0003;P=0.0000);肝硬化和肝细胞癌组织中KAll基因mRNA的表达无显著差异(p=0.4152);KAIlmRNA在不同分化程度的肝细胞癌组织中的表达无显著差异(P=0.8261),而Ⅲ期肝细胞癌组织中的KAll基因表达显著低于Ⅱ期的肝细胞癌组织(P=0.0221)结论转移抑制基因KAI1在肝硬化阶段亦有低表达;肝癌组织中KAI1基因的低表达与肝癌的转移有关.
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乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达及其临床意义
目的:检测乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达并分析其临床意义.方法:用RT-PCR方法检测67例乳腺癌患者、29例乳腺良性疾病患者, 35例正常健康人外周血中组织特异性mRNA的表达.结果:67例乳腺癌患者中有18例外周血中组织特异性 mRNA表达阳性,阳性率为26.9%,与健康对照人群和乳腺良性疾病患者相比差异有显著意义,P＜0.05;Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者,P＜0.05,在不同病理类型乳腺癌患者外周血中的表达差异无显著意义,P＞0.05,手术后比手术前的阳性表达率低,但差异无显著意义,P＞0. 05.结论:乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的阳性表达同肿瘤的分期有关,可作为乳腺癌微转移的一个监测指标.
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基质金属蛋白酶-7mRNA在胃癌组织中表达的研究
目的:检测基质金属蛋白酶-7(MMP-7)基因在胃癌组织及癌旁组织中的表达,探讨MMP-7在胃癌发生发展中的作用.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织及相应癌旁组织中MMP-7基因的表达.结果:30例胃癌组织中有23例表达MMP-7基因,阳性率为76.7%,相应的30例癌旁组织均未检测到MMP-7基因表达.统计学分析表明,MMP-7基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异有统计学意义,χ2=37.297,P＜0.001.结论:胃癌组织中MMP-7基因具有高表达率,且表达具有高度肿瘤特异性,提示MMP-7在胃癌的生长和侵袭转移过程中有非常重要的作用.
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制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化
目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化.方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成.选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaI限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达.结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120 mg/L.②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25 mg/L浓度适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底.③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交.用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,.左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别.结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化.
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肿瘤转移复发分子标记物的进展趋势
转移复发是肿瘤患者死亡的主要原因,也是进一步延长患者生存的主要障碍.早期识别或预测哪些患者易于转移复发有助于及时有效地治疗并延长患者生存时间.人们一直在努力探索可以预测转移复发的指标,传统意义的预测指标包括肿瘤TNM分期、肿瘤大体及组织学与形态学特征,但这些难以准确预测肿瘤患者的预后.分子标记物可提供常规组织病理学特征以外的更多信息.近年,随着分子细胞生物学技术的进步以及对肿瘤生物学的更多了解,已探索了许多与肿瘤侵袭、转移、复发和生存相关的分子标记物.本文以肝细胞癌(HCC)为例,简要介绍肿瘤转移复发分子标记物的现状与趋势.
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BDNF AS对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 探讨脑源性神经营养因子反义长链非编码RNA(brain-derived neurotrophic factor antisense long noncoding RNA,BDNF AS)对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用BDNF AS过表达质粒及空载体瞬时转染肝癌细胞株HepG2和MHCC 97-H,采用实时PCR方法检测BDNF AS在肝癌细胞中的表达水平,采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS)方法检测细胞增殖情况,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化,采用划痕实验和transwell小室评价细胞迁移能力的变化.结果 HepG2和MHCC 97-H细胞转染BDNF AS过表达质粒后BDNF AS和mRNA表达均上调(均P＜0.01).转染第4天,细胞增殖均受到抑制(均P＜0.05).转染48 h后,HepG2和MHCC 97-H细胞均出现S期阻滞(均P＜0.01),细胞的迁移能力均下降(均P＜0.01).结论 BDNF AS过表达抑制肝癌细胞的增殖和迁移,可能对肝癌细胞的生长运动具有重要的负性调控作用.
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TGF-β1对慢性EAE模型C57BL/6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达影响的研究
目的 观察外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对慢性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)C57BL/6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达目的影响.方法 72只C57BL/6小鼠,随机分为致病组(A组)、干预组(B组)、佐剂对照组(C组)、干预对照组(D组).各组小鼠取发病初、发病高峰和慢性期不同时间点分为1、2、3亚组.用盲法每天观察动物行为活动,称体重并按Benson评分标准做EAE严重性目的临床评估, RT-PCR技术观察各组各期脑和脾组织Foxp3 mRNA目的表达变化.结果 A1～3组平均Benson标准评分分别为2.3±0.4分、3.9±0.5分、3.5±0.4分,B1～3组Benson标准评分2.7±0.4分、4.3±0.5分、2.8±0.5分.A组和B组评分有统计学差异(P＜0.05).D组为假干预组, D1～D3组,平均Benson标准评分分别为2.4±0.5分、4.0±0.4分、3.6±0.3,与A组无统计学差异(P＞0.05),而与B组有统计学差异(P＜0.05).佐剂对照组Benson标准评分为0分.致病组和干预组小鼠脑和脾Foxp3在发病初期表达下降,高峰期下降明显,相比有统计学差异(P<0.05),到慢性期上升,与高峰期相比有统计学差异(P<0.01).假干预组Foxp3各时期表达与致病组无统计学差异(P>0.05),表达变化同致病组.干预组小鼠脑和脾Foxp3表达在发病初期就已下降,但与致病组和假干预组没有统计学差异.在发病高峰期下降较致病组和假干预组明显,并有统计学差异(P<0.05),在慢性期较致病组表达上升,并有统计学差异(P<0.01).结论 外源性TGF-β1对慢性EAE产生较复杂目的影响,高峰期可以使Foxp3表达进一步下调,症状加重,但在慢性期可使Foxp3表达明显上调,从而促进病情缓解.
关键词： 转化生长因子β/药理学 RNA 信使/生物合成 小鼠 近交C57BL
