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急相蛋白质类/遗传学文献资料
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LCN2基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定
目的 为进一步研究LCN2(Lipocalin 2)基因在急性肾损伤中的作用,克隆LCN2的编码序列,构建含LCN2基因的荧光素酶报告基因载体,并在肾小管上皮细胞系HK-2 中表达.方法 以HK-2细胞系提取的RNA为模板进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用HindⅢ和SmaI双酶切后克隆到双荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中,用非脂质体法将构建质粒PGL3-Basic /LCN2导入HK-2 中,氨苄青霉素选择培养,经双荧光素酶鉴定其表达.结果 PCR和测序结果表明扩增的LCN2启动子序列正确,酶切检测证实重组荧光素酶报告基因载体构建成功.转染PGL3-Basic/LCN2 质粒的HK-2细胞荧光素酶活性比转染空载体的明显增加(P<0.000 1).结论 成功克隆了LCN2的编码序列,构建了其荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic/LCN2,有助于进一步研究LCN2基因在急性肾损伤中的作用机制.
关键词： 急相蛋白质类/遗传学 原癌基因蛋白质类/遗传学 肾/损伤
