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Notch 配体阳性的成纤维基质细胞体外诱导胸腺细胞发育和凋亡的影响
目的 观察表达Notch 配体的基质细胞在体外诱导对小鼠胸腺T 淋巴细胞表面抗原表达和细胞凋亡的影响.方法 应用Notch 配体(Delta1 和Jagged1)阳性的L 细胞,与胸腺T 淋巴细胞或经过分选纯化的CD4 + CD8 +双阳性T 淋巴细胞进行体外共培养,观察了Notch 配体阳性细胞对T 淋巴细胞表面CD4 和CD8 抗原的表达变化以及T 淋巴细胞向单阳性淋巴细胞转化的影响,同时应用Annexin-V 抗体观察了细胞凋亡的变化.结果 经过与Delta1 和Jagged1 配体阳性细胞共孵育后,CD4+ CD8+双阳性T 淋巴细胞转化率降低5.7%和7.6%,其中向CD4+单阳性淋巴细胞的转化明显受到抑制,分别下降了12.8%和6.7%,而CD8 +单阳性淋巴细胞的比例没有明显改变;淋巴细胞凋亡也明显降低了30%.结论 Notch 和配体相互作用可能参与并抑制T 淋巴细胞的晚期成熟分化.
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大鼠Delta1基因真核表达载体的构建与鉴定
背景:近有数据表明,Notch信号通路在外周移植免疫应答反应中发挥重要的调节作用,可以促进调节性T的分化,诱导抗原特异性的免疫耐受.推测Notch/Notch配体可能在MHC:TCR界面发挥作用.目的:构建大鼠Deltal基因(Notch配体)真核表达载体,并观察其在树突状细胞中的表达.方法:应用RT-PCR方法从大鼠骨髓细胞中获得全长Delta1基因片段,并将此基因片段构建在pcDNA3.1(+)真核表达载体上.利用脂质体基因转染技术将含大鼠Delta1基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Delta1转染入树突状细胞中,观察Delta1基因在树突状细胞中的表达.结果与结论:双酶切鉴定结果显示,Delta1已成功构建在pcDNA3.1的Hindlll和Xbal双酶切位点之间,任选一个酶切阳性克隆pcDNA3.1/Deltal送上海生工生物公司进行序列测定,测序结果与Genebank中Delta1基因序列完全一致,阅读框正确.转染Delta1基因的树突状细胞形态与其亲本细胞类似,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Deltal的表达显著增高.实验成功利用基因转染方法将Delta1基因导入树突状细胞,构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/Delta1,并使之高效表达并分泌Delta1蛋白.
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益胃汤对EMs模型大鼠异位子宫内膜Notch1、Delta1和Jagged1表达的影响
目的 考察益胃汤对自体移植子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜Notch1、Delta1及Jagged1表达的影响,为其干预EMs提供依据.方法 建立SD大鼠自体移植EMs模型,将造模成功的大鼠随机分成模型对照组,丹那唑组(0.20 g/kg),益胃汤高(27.00 g/kg)、中(13.50 g/kg)、低剂量(6.75 g/kg)组,药物连续干预4周后,测量异位子宫内膜体积,并采用Western blot法检测各组动物子宫内膜中NOTCH1蛋白表达;采用免疫组化法检测各组大鼠内膜DELTA1及JAGGED1蛋白表达.结果 与模型对照组比较,益胃汤给药后,EMs模型大鼠异位子宫内膜体积显著缩小(P＜0.01),益胃汤高剂量大鼠异位内膜中NOTCH1相对表达量和DELTAL1平均光密度显著减少(P＜0.01);益胃汤高、中剂量组中JAGGED1平均光密度明显降低(P＜0.05).结论 益胃汤改善EMs与降低异位子宫内膜Notch1、Deha1和Jagged1的表达有关.
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Notch-Jagged/Delta信号通路在佐剂关节炎大鼠肺功能降低中的作用
目的:观察佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能、肺组织Notch信号通路的变化,探讨AA大鼠肺功能降低的机制.方法:将30只大鼠随机分为正常组和模型组,每组15只,向模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 mL致炎,复制成AA模型.致炎30 d后,观察两组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数、肺功能、肺病理形态学及肺组织Notch受体/配体表达的变化.结果:与正常组相比,模型组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数、肺功能参数0.3 s内平均呼气流量(FEV0.3/FVC)、肺泡炎程度、肺组织Notch3和Notch4及Jagged2的表达升高(P＜0.05或P＜0.01);50％肺活量的大呼气流量(FEF50)、75％肺活量的大呼气流量(FEF75)、用力大呼气流量(PEF)降低,肺组织Notch1,Jagged1,Delta1的表达降低(P＜0.01).相关分析显示:大鼠肺功能参数FEV03/FVC与Notch4呈正相关,FEV0.3/FVC,FEF25,FEF50分别与足跖肿胀度,Notch3,Delta1的表达呈负相关(P＜0.05或P＜0.01).结论:AA大鼠在发生足跖肿胀、关节炎症同时出现肺功能降低,且肺功能参数与Notch受体/配体呈相关性,提示致炎后免疫复合物沉积于组织局部,激活Notch信号通路,通过级联放大效应协同参与肺组织损伤,导致肺功能降低.
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Notch配体在诱导淋巴细胞分化中的不同作用
脊椎动物Notch配体为一组单次跨膜蛋白,包括Delta1, Delta3, Delta4, Jagged1 和 Jagged2,它们与Notch受体结合激活Notch信号通路,决定细胞分化的命运.这些Notch配体具有不同的生物学特性,在诱导造血干/祖细胞和胸腺细胞向T、B和NK细胞分化中起着不同作用,可能为免疫性疾病的治疗提供新的药物靶点.
