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BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型的构建
目的：构建BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼肝转移模型，分析斑马鱼肝内转移性结肠癌细胞BAMBI基因表达水平与肝转移发生率的关联性。方法分别构建BAMBI过表达稳转结肠癌细胞株SW620（BAMBI＋组）、空载体红色荧光蛋白基因转染结肠癌细胞株SW620（EV组），分别显微注射到受精后第2天转基因斑马鱼Tg（Apo14∶GFP）胚胎卵黄囊（每组各680条），激光共聚焦荧光显微镜观察、拍摄，采用ImageJ软件测量转移至斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度，计算肝转移发生率；采用t检验比较BAMBI＋组及EV组斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度及肝转移发生率的差异。结果与EV组相比，激光共聚焦荧光显微观察显示BAMBI＋组斑马鱼肝内结肠癌细胞红色荧光表达量显著增加（t=6.247，P=0.0033）；BAMBI＋组斑马鱼肝转移发生率与EV组相比显著增加（t=4.276，P=0.0129）。结论构建了基因修饰人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型，可较好地模拟活体状态的结肠癌肝转移；BAMBI基因可促进异种移植入斑马鱼的结肠癌细胞发生肝转移。
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BAMBI基因敲除小鼠的繁育、基因型鉴定
目的 探讨BAMBI-/-小鼠的繁殖和鉴定方法,筛选出足够数量的BAMBI-/-小鼠,为研究BAMBI基因在肥胖、能量代谢等方面的生理功能提供实验动物.方法 将引进的2对BAMBI-/-小鼠扩繁后,以与背景品系C57BL/6J野生型(WT)回交的方式获得BAMBI+/-小鼠,再将BAMBI+/-小鼠进行互交大量繁殖.提取幼鼠尾部组织DNA,利用PCR方法鉴定基因型;选取BAMBI-/-小鼠取肩胛部位棕色脂肪组织(BAT),腹股沟部位皮下白色脂肪组织(sWAT),性腺周围白色脂肪组织(gWAT)和肝脏,利用实时PCR方法检测BAMBI mRNA的表达量.结果 BAMBI+/-小鼠互交扩繁,短期能获得大量小鼠;C57BL/6J野生型(WT)、BAMBI+/-和BAMBI-/-各表型结果基本符合孟德尔遗传规律;BAMBI-/-小鼠敲除效率理想.结论 BAMBI+/-小鼠互交是繁育BAMBI-/-小鼠的较好方法;PCR方法能够准确鉴定BAMBI-/-小鼠.
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BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移
目的 探讨过表达激活素膜结合抑制剂(bmp and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI)对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)增殖和迁移的影响.方法 将RF/6A细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧+pFLAG组和缺氧+BAMBI组.Western blot检测各组细胞中BAMBI的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Transwell检测细胞的迁移,Western blot检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果 与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养120 h后,对照组细胞增殖倍数为5.00±0.28,缺氧组为7.64±0.32 (P ＜0.001);缺氧组S期进程显著加快,占(10.44±2.61)％,对照组S期占(20.79±2.23)％(P＜0.05);细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为33.80±4.20,对照组为8.35±2.50(P ＜0.05),TGF-β1和VEGF的表达明显增加(P＜0.05).缺氧+BAMBI组:缺氧处理的细胞转染pFLAG-BAM-BI后,与缺氧组相比,BAMBI蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养120 h后,增殖倍数为5.53±0.27 (P＜0.001),细胞S期受到阻滞,占(18.75±2.92)％,迁移显著下降,数目为13.00±2.80 (P ＜0.05),TGF-β1和VEGF的表达明显下调(P＜0.05).结论 过表达BAMBI可抑制缺氧诱导的RF/6A细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生.
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BAMBI在小鼠不同类型脂肪组织发育及脂肪细胞分化过程中的差异表达规律
目的：研究BAMBI基因在小鼠不同脂肪组织发育过程中的表达规律。方法利用RT-qPCR及Western blot技术检测BAMBI基因在小鼠不同类型脂肪组织、不同发育阶段（胚胎第18天、出生第0天、第21天、第8周和第6个月）及原代前体脂肪细胞分化过程中（分化第0、3、7、11天）的差异表达情况。结果随着脂肪组织的发育，BAMBI mRNA及蛋白的表达量逐渐降低；在发育的同一时间段，BAMBI mRNA在内脏白色脂肪组织较皮下白色脂肪组织表达量高，在棕色脂肪组织中表达量低；在小鼠前体脂肪细胞诱导分化过程中，BAMBI mRNA表达量呈时间依赖性降低。结论提示BAMBI的差异表达规律与脂肪组织类型、发育阶段以及脂肪细胞分化程度密切相关，其在脂肪组织发育过程中起着重要的作用。
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重组慢病毒BAMBI-shRNA对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨重组慢病毒BAMBI-shRNA对结肠癌细胞体外侵袭转移能力的影响.方法 设计并合成慢病毒shRNA-BAMBI载体,转染入体外培养的人结肠癌细胞株HCT-116,转染分组:空白对照组(A组)、阴性对照组(B组)和实验组(C组);采用Western blot检测转染后HCT-116细胞中BAMBI蛋白表达水平;采用Transwell实验分析慢病毒shRNA-BAMBI载体对HCT-116细胞体外迁移力和侵袭力的影响.结果 C组BAMBI蛋白的表达强度弱于A组和B组(P＜0.05),而A组与B组比较,BAMBI蛋白表达水平则无统计学差异(t=1.629,P＞0.05).细胞迁移和侵袭实验中,转染作用24 h后,C组迁移穿膜细胞数和侵袭穿膜细胞数均明显减少,明显低于其余两组(P＜0.05),而A组和B组之间比较无统计学差异(P＞ 0.05).结论 BAMBI-shRNA慢病毒能通过沉默HCT-116细胞中BAMBI蛋白的表达,降低HCT-116细胞的侵袭和迁移能力.
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骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂调节自噬抑制谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经组织细胞凋亡
目的 探讨过表达骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BMP and activin membrane-boundinhibitor,BAMBI)对谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡的影响.方法 原代培养新生Wistar大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞,将细胞分为6组:正常对照组,谷氨酸组,空载组,BAMBI过表达组,siRNA对照组和BAMBI沉默组.Western blot检测各组细胞中BAMBI的表达,流式检测细胞凋亡,Western blot检测自噬标志分子微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein lightchain 3,LC3),Beclin1和p62的表达,荧光显微镜检测GFP-LC3的含量,后Western blot检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1 β),裂解后的半胱天冬酶(cleaved-Caspase3)的表达.结果 与对照组相比,谷氨酸诱导的细胞凋亡增加,LC3-Ⅰ的表达降低,LC3-Ⅱ,Beclin1和p62的表达增加,GFP-LC3的含量增加,TNF-α、IL-1 β和cleaved-Caspase3的表达增加(P＜0.05);与谷氨酸组相比,转染pcDNA-BAMBI的细胞凋亡减少,LC3和Beclin1的表达显著增加,LC3-Ⅰ和p62的表达降低,细胞内可见大量的GFP-LC3堆积,TNF-α、IL-1β和cleaved-Caspase3的表达显著下降(P＜0.05).BAMBI沉默组的结果与过表达组相反.结论 过表达BAMBI可增强自噬,抑制谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡.
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BAMBI在非小细胞肺癌中的分布和mRNA表达
背景与目的 BAMBI(BMP and activin membrane-bound inhibitor)与TGF-βⅠ型受体具有相似的结构,从而广泛参与TGF-Ⅰ信号的调控.通过检测BAMBI在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达分布情况,探讨其与NSCLC临床病理因素之间的关系.方法 63例NSCLC及癌旁正常组织标本用于免疫组织化学检测.其中31例新鲜肺癌组织及癌旁正常肺组织标本,术后立即投入液氮速冻之后,于-70℃保存,用于RT-PCR检测.结果 BAMBI mRNA在癌旁组织中有较弱的表达,其在癌组织中的表达高于相应的癌旁组织(0.358±0.135vs 0.249±0.129),差异具有统计学意义(P=0.003).BAMBI蛋白主要表达在胞膜和靠近胞膜的胞浆,其在癌组织中的表达高于癌旁组织,两者差异具有统计学意义(P<0.01).其蛋白和mRNA在NSCLC癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其在肺鳞癌中的表达低于肺腺癌.结论 BAMBI在非小细胞肺癌中表达明显增加,BAMBI的过表达与非小细胞肺癌的发生有关.
