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siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响
目的 研究hTERT-siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响.方法 利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达,应用细胞直接计数法和流式细胞术(FCM)检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化.结果 在hTERT-siRNA的使用浓度为50 nm、Lipo转染浓度为3 μl/2 ml转染体积和hTERT沉默效率为100%的条件下,转染hTERT-siRNA 24 h后,细胞生长已明显减慢,抑制细胞增殖率为26.39%(P＜0.05),第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46.77%、70.61%、84.71%和85.99%(P＜0.001).随着转染细胞按常规培养时间的延长,早期凋亡细胞明显增多(P＜0.001),以24 h后更明显;活性细胞明显减少(P＜0.001),而损伤细胞明显增多(P＜0.001),以6 h后明显;死亡细胞明显增多(P＜0.001),以24 h后更明显.siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异(P＜0.001).G0～G1期细胞明显增多(P＜0.01),S期细胞明显减少(P＜0.01),以24 h后明显;G2～M期细胞明显减少(P＜0.01),以48 h后明显;晚期凋亡细胞增多(P＜0.05),以48 h后明显.结论 hTERT-siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长,使较多的细胞停留在G0～G1期,而进入G2～M期和S期的细胞减少,可促进细胞凋亡.
关键词： 胰腺肿瘤 Capan-2细胞株 RNA指导的DNA聚合酶 RNA 小分子干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 -
白血病抑制因子在胰腺癌细胞中的表达及意义
目的 了解胰腺导管腺癌(PDAC)中白血病抑制因子(LIF)表达相关性及其临床病理学意义,并探讨白血病抑制因子对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法 应用免疫组织化学方法检测53例配对的PDAC及癌旁组织石蜡标本LIF蛋白表达水平,并分析LIF表达与患者临床病理学各项指标的关系,再以Western印迹法检测14对配对冷冻保存的新鲜PDAC和癌旁组织中LIF表达水平,然后运用Western印迹和聚合酶链反应(PCR)检测6株胰腺癌细胞系(AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、SW-1990、Capan-2与Miapaca-2)中白血病抑制因子(LIF)蛋白和LIF-R mRNA表达水平,再运用MTT、Transwell实验检测LIF对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响.结果 在53例胰腺癌组织中LIF的阳性表达率为66.0％ (35/53),在癌旁非肿瘤性胰腺导管中阳性表达率为35.8％(19/53);LIF在癌组织中表达明显高于配对的癌旁组织(66.0％与35.8％;t=3.031,P=0.004);LIF表达与肿瘤TNM分期(x2=3.635,P=0.057)、浸润深度(x2 =3.726,P =0.054)差异无统计学意义,但有明显的趋势效应.LIF在14对PDAC中表达水平同样高于癌旁组织(t=5.283,P＜0.01).免疫印迹和PCR显示:LIF因子在Capan-2中的表达水平相对低于其他5株细胞系,而其受体mRNA在Capan-2细胞中的表达水平相对高于其余5株细胞系.LIF因子能够促进Capan-2细胞的增殖(P＜0.05).并且能够增加Capan-2细胞的迁移及侵袭能力(P＜0.05).结论 LIF在胰腺癌高表达可能参与胰腺癌的发生进展,且在部分胰腺癌细胞系中,LIF能够促进胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移.
关键词： 胰腺肿瘤 白血病抑制因子 Capan-2细胞株
