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不同银染法和上样模式对双向凝胶电泳影响的初步分析
双向凝胶电泳(2-DE)技术是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一.该技术利用蛋白质2项独立物化参数--等电点(pI)和分子量的差异,将高分辨率的等电聚焦电泳(IEF)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)程序相组合.2-DE常用的标本上样方式有溶涨上样和杯上样.前者溶涨与等电聚焦同时进行,后者溶涨与等电聚焦依次进行.常用的下游蛋白质显示技术包括同位素标记法、荧光标记法、染料标记法、金属和重金属离子标记法.银染法属金属离子还原染色,分双胺银染法和非双胺化学显色银染法.本研究通过比较两种上样方式和两种银染法对人肝癌细胞系MHCC97H、97L的2-DE图谱的影响,以期建立较理想的实验室内2-DE相关技术的方法.
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Wnt 信号通路在脊柱损伤继发骨质疏松中的作用
骨质疏松是一个世界性的健康问题。骨质疏松发生的原因有原发和继发两大类型。常见病因有年龄增长、女性绝经、营养不良尤其是钙缺乏、甲状腺功能亢进、皮质醇增多等，在诸多继发性骨质疏松发病原因中，脊柱损伤继发骨质疏松越来越多地引起研究者的关注。脊髓损伤后继发性骨质疏松临床表现特殊，单一的制动理论无法解释这样严重的骨量丢失，骨结构退变和骨生物力学性能的下降［1］。目前越来越多的研究集中在骨骼的神经调节通路上［2］。Wnt 信号通路是一个复杂的蛋白质作用网络，其功能常见于胚胎发育和癌症，但也参与成年动物的正常生理过程［3］。经典 Wnt通路包括 Dishevelled 受体家族蛋白质的激活及终细胞核内β-连环素蛋白（β- catenin）水平的变化。Dishevelled 是细胞膜相关 Wnt 受体复合物的关键成分，它与 Wnt 结合后被激活，抑制下游蛋白质复合物，包括 axin、GSK -3与腺瘤样结肠息肉（ adenomatous polyposis coli，APC）蛋白。axin/GSK -3/ APC 复合体可促进细胞内信号分子β- catenin 的降解。当β- catenin 降解复合物被抑制后，胞浆内的β-catenin 得以稳定存在，部分β- catenin 进入细胞核与 T 细胞因子（TCF）/增强淋巴因子（LEF）转录因子家族作用并促进特定基因的表达。近些年来，人们开始关注 Wnt 信号通路骨质疏松发病中发挥的作用［4］。本文主要对脊柱损伤后继发骨质疏松的发病机制中，Wnt 信号通路如何表达与发挥作用作一综述。
