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评价三种检测AmpC酶的方法及临床应用
AmpC酶是一类既可由染色体介导,又可由质粒介导的头孢菌素酶,它与质粒介导的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是导致革兰阴性杆菌耐药的重要的两类酶.ESBLs的检测方法有多种[1],并日趋成熟,而检测AmpC酶缺乏足够的流行病学资料,尚无统一标准的方法.本研究采用酶提取物三维试验、头孢西丁三相试验及氯唑西林双纸片协同法同时检测阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌的AmpC酶,并加以比较,以找出一种适合临床常规应用的检测AmpC酶的方法.同时了解本院临床分离的菌株AmpC酶的流行情况.
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第104例——高热、气急、咳嗽、血痰
病历摘要患者男,35岁,因发热(体温39.1℃)1 d就诊,无咳嗽,肺部听诊无啰音,血常规显示白细胞5.2×109/L,中性粒细胞0.81.患者曾于门、急诊留观时先后给予舒巴坦钠/氨苄青霉素钠9 g+阿昔洛韦0.5 g静脉滴注2 d、氯唑西林6 g+左氧氟沙星0.4 g静脉滴注2 d,但体温仍不退,至第4天患者出现气急,伴咳嗽、咳痰(开始为白色泡沫样,后出现痰中带血),两肺闻及细湿哕音,X线胸片显示两下肺小片状高密度影(图1),诊断为两下肺炎,继续给予抗感染治疗,并联用氨茶碱0.25 g、地塞米松10 mg及复方氨基比林2 ml等,患者气急仍无缓解并呈进行性加重,肺部啰音增多,于第5天两肺满布大水泡音即转入呼吸科病房.
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双纸片氯唑西林增效试验检测高产AmpC酶的阴沟肠杆菌
目的:尝试建立易于操作、适合临床应用的检测高产AmpC酶阴沟肠杆菌的方法.方法:在标准头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南纸片上分别附加0、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg氯唑西林,按标准纸片扩散试验程序分别测定未附加氯唑西林时和附加氯唑西林后上述纸片对108株受试菌的抑菌环直径,根据氯唑西林对4种抗生素的增效作用判断受试菌是否高产AmpC酶,检测结果与头孢西丁三维试验的结果进行对比.结果:三维试验证实,在108株阴沟肠杆菌中,高产AmpC酶菌株32株,非高产AmpC酶菌株76株.以50μg氯唑西林为酶抑制剂时,如果分别考虑头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南做为药敏指示剂时的检测结果,双纸片氯唑西林增效试验的阳性率分别为90.6%(29/32)、68.8%(22/32)、65.6%(21/32)、59.4%(19/32);如果同时考虑头孢他啶和头孢噻肟(或头孢曲松)做为药敏指示剂时的检测结果,双纸片氯唑西林增效试验的阳性率达到了100%(32/32).同样条件下,用双纸片氯唑西林增效试验检测76株非高产AmpC酶的阴沟肠杆菌,未发现假阳性菌株.结论:以50μg氯唑西林为酶抑制剂、联合使用头孢他啶和头孢噻肟(或头孢曲松)做为药敏指示剂,双纸片氯唑西林增效试验可以替代头孢西丁三维试验,特异性地检出高产AmpC酶的阴沟肠杆菌,而且操作简便,适合临床使用.
关键词: 阴沟肠杆菌 AmpC β-内酰胺酶 氯唑西林 检测方法 -
革兰阴性菌产AmpC酶的研究进展
1 AmpC酶的基本特性AmpCβ-内酰胺酶是一族由革兰阴性杆菌产生的、具有碱性等电点、不被克拉维酸抑制而能被氯唑西林抑制的"丝氨酸"头孢菌素酶,按功能特征分类属Bush-J-M 1组,按分子结构分类属Ambler C类.分子量通常在32~41kD之间,个别质粒介导的AmpC酶分子量达到42~43kD.高产此类酶可以导致细菌对除第四代头孢菌素和碳青霉烯类抗生素外的几乎所有β-内酰胺抗生素产生耐药.
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抗生素与抗菌药发展史
(接上期)抗生素结构修饰改善了天然药物的性能,推动抗生素进一步发展20世纪50年代末,分离出青霉素主核6-氨基青霉烷酸(6-A-PA),并由此出发经结构修饰获得了耐酸可口服的丙匹西林,耐青霉素酶的甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林,广谱的氨苄西林、阿莫西林,对绿脓杆菌亦有效的羧苄西林、磺苄西林、哌拉西林和抗革兰阴性细菌的美西林等多个系列有特色的半合成青霉素,有效地弥补了天然青霉素的缺陷.
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关于施行《抗菌药物临床应用指导原则》的通知(续二)第三部分各类抗菌药物的适应证和注意事项
青霉素类抗生素本类药物可分为:(1)主要作用于革兰阳性细菌的药物,如青霉素(G)、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、青霉素V(苯氧甲基青霉素).(2)耐青霉素酶青霉素,如甲氧西林(现仅用于药敏试验)、苯唑西林、氯唑西林等.(3)广谱青霉素,抗菌谱除革兰阳性菌外,还包括:①对部分肠杆菌科细菌有抗菌活性者,如氨苄西林、阿莫西林;②对多数革兰阴性杆菌包括铜绿假单胞菌具抗菌活性者,如哌拉西林、阿洛西林、美洛西林.
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医疗纠纷用药利弊分析——青霉素类药物用药分析
青霉素类抗生素是β-内酰胺类中一大类抗生素的总称,按其特点可分为 :①青霉素G类,如青霉素G钾、青霉素G钠、苄星青霉素等 .②耐酶青霉素,如苯唑西林(新青Ⅱ号)、氯唑西林等.③广谱青霉素,如氨苄西林、阿莫西林等.④抗绿脓杆菌的广谱青霉素,如羧苄西林、哌拉西林、呋布西林等.⑤耐酶的氮卓咪青霉素,如美西林等.青霉素作用于细菌的细胞壁,而人类只有细胞膜无细胞壁,故对人类的毒性较小,是化疗指数大的抗生素.但青霉素引起的变态反应在各种药物中居首位,发生率高可达5%~10%.严重者出现过敏性休克,多在注射后数分钟内发生,症状为呼吸困难、发绀、血压下降、昏迷、肢体强直,后惊厥,抢救不及时可造成死亡.青霉素类药品各种给药途径都能引起过敏性休克,但以注射用药的发生率高.变态反应的发生与药物剂量大小无关.对青霉素高度过敏者,虽极微量亦能引起休克.
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国家基本药物用药指导(一)青霉素类药物
[药物类别]抗生素[适应证]本类药物可分为:①主要作用于革兰染色阳性细菌的药物,如青霉素(G)、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、青霉素V(苯氧甲基青霉素).②耐青霉素酶青霉素,如甲氧西林(现仅用于药敏试验)、苯唑西林、氯唑西林等.③广谱青霉素,抗菌谱除革兰阳性菌外,还包括:对部分肠杆菌科细菌有抗菌活性者,如氨苄西林、阿莫西林;对多数革兰阴性杆菌包括铜绿假单胞菌具抗菌活性者,如哌拉西林、阿洛西林、美洛西林.
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HPLC 法同时测定注射用阿莫西林钠氯唑西林钠的含量分析
目的:分析 HPLC(高效液相色谱法)同时测定注射用阿莫西林钠、氯唑西林钠含量。方法:采用 C18柱,流动相为磷酸二氢钾0.1mol/L、十二烷基硫酸钠0.018mol/L、甲醇、乙腈,225nm 为检测波长。结果:氯唑西林68.1μg/mL-340.1μg/mL 范围呈良好线性关系(r=0.9998),阿莫西林69.2μg/mL-345.9μg/mL 范围呈良好线性关系(r=0.9999.)。氯唑西林加样回收率平均为99.7%(RSD=1.4%,n=9),阿莫西林加样回收率平均为99.2%(RSD=0.97%,n=9)。结论:HPLC 法同时测定结果准确,操作简便,并且具有较强专属性。
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注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量测定
用阳离子交换柱的HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠中氨苄西林和氯唑西林的含量.色谱条件:采用Hypersil SCX柱,磷酸盐缓冲液(0.01mol/L磷酸氢二铵溶液,用磷酸调节pH值6.0):乙腈(90:10)为流动相,检测波长225nm.氨苄西林和氯唑西林分别在45~134和44~13μg/ml范国内呈良好的线性关系,日内RSD分别为0.5%和0.6%,回收率分别为99.9%和100.0%,含量测定结果与国家药品标准方法所得结果相符.
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氯唑西林片剂与胶囊剂的人体生物等效性
目的 评价氯唑西林片剂与胶囊剂在人体内的生物等效性.方法 20名健康男性受试者随机交叉给药,单剂量口服500 mg受试制剂氯唑西林片和参比制剂氯唑西林钠胶囊,采用反相高效液相色谱法测定氯唑西林的血药浓度,用3P97软件进行药动学参数计算和生物等效性评价.结果 受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:t1/2分别为(1.3±s 0.3)和(1.21±0.26)h,cmax分别为(14±4)和(15±4)mg·L-1,tmax分别为(0.73±0.26)和(0.74±0.17)h,A UC0-1分别为(23±5)和(24±6)mg·h·L-1,A UC0~∞分别为(23±5)和(25±6)mg·h·L-1,经方差分析和双单侧t检验显示,主要药动学参数无显著差异;受试制剂的相对生物利用度为(98±27)%.结论 2种氯唑西林制剂具有生物等效性.
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复方氨氯西林胶囊在健康志愿者中的药动学
目的 研究在中国健康志愿者中口服复方氨氯西林胶囊的药动学.方法 12名健康志愿者,按拉丁方设计随机分组,分别口服复方氨氯西林胶囊0.5,1.0和2.0 g,采用液相色谱串联质谱法检测给药后的血药浓度,DAS1.0软件计算药动学参数.结果 健康受试者单剂量口服复方氨氯西林胶囊0.5,1.0,2.0 g,氨苄西林和氯唑西林药-时曲线符合一房室模型,权重采用1/C/C.氨苄西林主要药动学参数分别为t1/2(0.99±s 0.15)、(1.03±0.15)、(1.2±0.3)h;AUC0~t(18±4)、(31±10)、(44±11)mg·h·L-1.氯唑西林主要药动学参数分别为t1/2(1.1±0.3)、(1.12±0.27)、(1.08±0.14)h;AUC0~t(2.3±0.6)、(5.1±1.1)、(10.2±2.0)mg·h·L-1.氨苄西林和氯唑西林各剂量组药动学参数除cmax AUC0~t、AUC0~∞外,tmax、t1/2、Ke、MRT差异均无统计学意义,cmax、AUC0~t、AUC0~∞均与给药剂量呈线性相关(P<0.01).结论 12名健康受试者分别口服复方氨氯西林胶囊后,在0.5 g~2 g剂量范围内呈线性人体药动学特征.
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注射用氨氯青霉素钠中氨苄西林和氯唑西林含量的HPLC测定
利用HPLC测定注射用氨氯青霉素钠中氨苄西林和氯唑西林的含量.用Hypersil ODS2(150×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为水-1 mol/L磷酸二氢钾溶液-1 mol/L乙酸溶液-甲醇(492∶7.5∶0.5∶500,pH5.2),检测波长为245 nm.方法精密度及线性关系良好,氨苄西林和氯唑西林的平均回收率分别为99.8%(RSD1.12%)和99.5%(RSD1.43%),本法简便准确.
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Amp C酶检测方法的探讨
目的 建立简便检测肠杆菌科细菌中Amp C酶的方法.方法 分别采用双纸片确证法和多剂量协同法检测35株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,并用三维试验和Amp C酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBL的情况.结果 双纸片确证法检测出12株Amp C酶,不受ESBL的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验,多剂量协同法敏感性较差.结论 双纸片确证法可作为临床检测Amp C酶的方法.
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乏氏窦瘤破裂和室间隔缺损并发感染性心内膜炎一例
1 病例摘要患者男,41岁,因反复发热、乏力1个月余,左季肋部疼痛4 d,伴高热、寒战,于2004年10月19日入本院.1个月前患者感冒后出现发热,自测体温37.8℃,不伴畏寒、咳嗽、胸痛、气促,自服"退烧药"(具体不详),体温不降,但逐渐出现乏力、纳差,1个月体重下降13 kg.曾在当地医院住院治疗,化验外周血白细胞(WBC)11.8×109/L,中性(N)75.9%,血红蛋白(Hb)11.5 g/dl,血沉(ESR)42 mm/第1h;X线胸片提示:左下肺感染、左胸膜改变、心影增大,考虑"左肺炎".给予阿洛西林+培氟沙星治疗,3 d后体温正常,但在胸骨左缘3、4肋间闻及连续性杂音.10月11日来本院行超声心动图检查,提示"先心、室缺、右乏氏窦瘤破裂",未发现明显赘生物.4 d前在当地住院时突发左季肋部疼痛,体温骤升至39.7℃,伴寒战、咳嗽,无咯血、气促,2次血培养均阴性,疑诊"感染性心内膜炎",予氯唑西林+庆大霉素治疗,体温呈下降趋势.患者否认有突发胸骨后疼痛、呼吸困难史,12岁时曾诊断为"先天性心脏病",但未进一步检查.
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控制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的新对策
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的医院内感染虽有万古霉素、阿贝卡星(arbekacin)、替考拉宁(teicoplanin)等治疗药物,但仍未摆脱临床危机和扩散状态,且门诊感染发生率增加。东京女子医科大学感染对策科菊池贤就MRSA的对策问题进行探讨(日本《医学论坛报》2001,34:8)。 他认为,近MRSA与10年前不一样,出现了新类型,并迅速超越国境传播。例如,决定甲氧西林耐药性的mecA基因Ⅰ-2型(凝固酶2型)在美日、Ⅲ型在欧洲和南美急剧增多。日本目前门诊患者中检出的金葡菌1/3为MRSA。 MRSA的传播也引起新疾患,如新生儿中毒性休克综合征(TSS)发疹病,其特征是新生儿生后7 天内皮肤出疹、发热、血小板减少,这是对MRSA产生的毒素-1型的免疫反应所致。 只有限制抗菌药应用才能减少医院耐药菌感染。日本口服抗菌药使用量依次为左氧氟沙星、克拉霉素,第三位以后是第三代头孢烯类。 从注射剂看,为预防无菌部位手术后感染,曾滥用头孢唑林(CEZ)、氟氧头孢(FMOX)或并用头孢美唑(CMZ)和磷霉素(FOM)。 近国外有报道称,术后预防感染使用CEZ反而使MRSA剧增,故日本医院术后预防用第一、第二代头孢烯类亦值得怀疑。该院循环科术后感染的分离菌有半数以上是凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)、MRSA和对甲氧西林敏感的金葡菌(MSSA),因此为预防无菌手术后感染,应选用对MRSA或MR-CNS都有效的抗菌药。 通过测定β-内酰胺类对MRSA的低抑菌浓度(MIC)发现,CEZ、FMOX对MRSA无抗菌作用;氧苄西林/舒巴坦和氨苄西林/氯唑西林比较有效。舒巴坦和氯唑西林并用即使未达到足够的MI C,但预期可抑制MRSA感染的发生率。 目前MRSA带菌者增加,可用莫匹罗星(mupirocin)鼻腔除菌,其抗菌谱虽窄,但并不抑制可排除RMSA的固有菌。自从莫匹罗星上市1年后,2227株金葡菌中仅4株中度耐药;但易获得莫匹罗星高度耐药基因mupA的5645株CNS仅有30株耐药,其中7株为高度耐药。因而应正确使用莫匹罗星,以免高度耐药菌株增殖。 积极增加固有菌亦能控制MRSA,如持续涂布棒状杆菌属,亦可消除MRSA。另外,在新生儿加强医疗病房(NICU)中,如果新生儿口腔和咽部没有绿色链球菌,则很多新生儿成为MRSA带菌者。因而对固有菌的作用应引起重视。据认为,固有菌产生的过氧化氢可抑制金葡菌。 由此可见,口鼻内固有菌的定殖可抑制新生儿MRSA,努力维持口鼻内正常菌群不被打乱,这是今后预防感染的重要一步。 摘自《中国医学论坛报》2001年4月19日3版
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抗菌药物临床应用指导原则(续五)
各类抗菌药物的适应证和注意事项1青霉素类抗生素该类药物可分为:①主要作用于革兰阳性细菌的药物,如青霉素G、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、青霉素V(苯氧甲基青霉素);②耐青霉素酶青霉素,如甲氧西林(目前仅用于药敏试验)、苯唑西林、氯唑西林等;③广谱青霉素,抗菌谱除革兰阳性菌外,还包括对部分肠杆菌科细菌有抗菌活性者,如氨苄西林、阿莫西林,以及对多数革兰阴性杆菌(包括铜绿假单胞菌)具有抗菌活性者,如哌拉西林、阿洛西林、美洛西林等.
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注射用氯唑西林钠中氯唑西林噻唑酸的分离及含量检测
目的:实现注射用氯唑西林钠中氯唑西林噻唑酸的分离及含量检测.方法:采用分子印迹-溶胶凝胶技术,以氯唑西林噻唑酸为模板,在活化硅胶表面制备具有特异性的分子印迹聚合物,并对合成条件进行优化.采用扫描电镜对聚合物进行形貌表征.将聚合物作为固相萃取填料,结合高效液相色谱法对氯唑西林钠中氯唑西林噻唑酸进行分离及含量检测.结果:当模板分子、功能单体和交联剂的摩尔比为1∶4∶28,溶剂为3mL,催化剂为300 μL,反应温度为30℃时,聚合物的吸附量和印迹因子佳.扫描电镜结果显示聚合物已成功接枝到硅胶表面.氯唑西林噻唑酸分子印迹聚合物和固相萃取相结合的方法,经方法学验证,在0.5~50 mg·g-1范围内呈现良好的线性关系(r=0.996 2),检测限为0.07 mg·g-1.结论:该方法的专属性、准确度和精密度均良好,能够实现氯唑西林钠中微量杂质氯唑西林噻唑酸的分离及含量检测.
关键词: 致敏性杂质 氯唑西林 分子印迹-溶胶凝胶技术 固相萃取技术 高效液相色谱法 -
反相高效液相色谱法同时测定氨苄氯唑西林中两组分的含量
目的:用RP-HPLC法同时测定注射用氨苄氯唑西林的含量.方法:色谱柱μBondapak C18;以0.035mol·L-1磷酸二氢钾(pH6.5)-甲醇(46:54)为流动相,咖啡因为内标,检测波长为225nm.结果:氨苄西林、氯唑西林在5~40μg·ml-1的浓度范围内,线性关系良好;平均回收率分别为99.5%(RSD=1.3%,n=9),103.1%(RSD=2.0%,n=9),与USP(ⅩⅩⅢ版)比较无显著性差异(P>0.05).结论:该方法简单、快速、准确.
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注射用氯唑西林钠与利巴韦林注射液配伍的稳定性
目的:考察注射用氯唑西林钠和利巴韦林注射液在0.9%氯化钠和5%葡萄糖注射液中的配伍稳定性.方法:在25℃条件下,观察配伍液在6 h内的外观、pH值变化,并用高效液相色谱法测定其含量变化.结果:两药配伍后,6 h内各项指标均无显著性变化.结论:注射用氯唑西林钠与利巴韦林注射液在0.9%氯化钠及5%葡萄糖注射液中配伍后在室温6 h内基本稳定.