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丹东市1989~1998年痢疾杆菌耐药性及质粒检测总结
由于痢疾杆菌耐药性日趋严重,而痢疾的耐药性与质粒介导有关,为掌握痢疾杆菌耐药性变迁规律,研究痢疾耐药性与质粒的关系,我们对痢疾杆菌的耐药性进行了连续监测,并对部分菌株做了质粒检测研究.现将1989~1998年结果总结如下.
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产超广谱β-内酰胺酶菌实验室检测技术的研究进展
自上世纪60年代β-内酰胺类抗生素被研制以来,一直广泛应用,目前占全球抗生素消耗的50%[1].尤其近些年来对β-内酰胺酶水解作用有抵抗性的新型该类药物也被研制应用,然而产β-内酰胺酶的细菌随即相继出现,其产生的超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum betalactamases,ESBLs)成为对第三代头孢类抗生素耐药的主要原因.ESBLs是质粒介导的A类酶,按Bush分类法归于2be酶[2],能有效水解青霉素、窄谱头孢菌素及一些广谱头孢菌素、单胺类抗生素(如氨曲南).β-内酰胺酶抑制剂(克拉维酸、青霉矾、他佐菌素)通常可以抑制产ESBLs菌株的生长[3].
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质粒介导喹诺酮耐药机制的研究进展
喹诺酮类抗菌药物是极易容易产生耐药性的药物之一.随着其在临床和畜牧养贿业的广泛应用,耐药性问题越来越受到普遍关注.除染色体突变引起的喹诺酮耐药外,质粒介导的喹诺酮耐药也取得了很大进展.本文就近年来有关质粒介导引起细菌对喹诺酮药物敏感性降低的研究简单概述如下.
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大肠埃希菌感染及耐药性分析
大肠埃希菌广泛存在于自然界,属于肠道正常菌群.当机体免疫力低下时,它可引起泌尿道、术后伤口等不同部位的感染.随着广谱抗生素的广泛应用,大肠埃希菌的耐药率愈来愈高,其中产质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株具有较高的耐药率和多重耐药性,给临床治疗带来很大困难.为此,本文对湖北地区11所医院的大肠埃希菌感染及其耐药情况进行了分析.
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医院肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药机制研究
目的 研究质粒介导的喹诺酮耐药基因在医院内的流行情况,检测菌株的耐药性,分析菌株间的同源性. 方法 收集临床分离的耐喹诺酮产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌,利用PCR方法对质粒耐药基因进行检测,阳性菌株进行接合试验,然后检测药物对供体菌、受体菌和接合子小抑菌浓度(MIC)值的变化,通过脉冲场电泳检测菌株间的同源性. 结果 所有菌株均未检出耐药基因qnrA与qnrC,其他7种耐药基因如qnrB均阳性,且部分菌株携带多个耐药基因.阳性菌株接合子对喹诺酮的耐药性增强并且有些质粒携带多种耐药基因,脉冲场电泳分析大肠埃希菌喹诺酮耐药株主要以发散为主,肺炎克雷伯菌主要以相对暴发流行为主. 结论 携带β-内酰胺酶基因的菌株,质粒介导的喹诺酮耐药基因检出率高,二者呈一定程度的共存.携带喹诺酮耐药基因的质粒水平转移,细菌对喹诺酮的耐药性增强,在免疫力低下人群,耐药菌株的传播更为迅速.
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肺炎克雷伯菌中发现新的qnrB31和qnrB32基因亚型
近来的研究发现,由质粒介导的qnr各类基因、aac(6′)-Ⅰ b-cr基因、qepA基因、mdfa基因的变异是引起喹诺酮类耐药的主要原因。这些基因缺乏分子或转座子介导,极易在同种或不同种细菌间传播。自从2006年Jacoby GA等在肺炎克雷伯菌上首先发现qnrB1基因以来,陆续有新的qnrB亚型发现。
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含qnrA基因质粒介导不同水平环丙沙星耐药性的机制研究
目的 研究4个含qnrA基因质粒在大肠埃希菌接合子中介导环丙沙星耐药水平不同的发生机制.方法 以大肠埃希菌J53作为受体菌,通过接合试验从4株qnrA阳性的临床菌株中获得4株接合子.采用E test方法测定环丙沙星低抑菌浓度(MIC);以PCR法检测aac(6')-Ib-cr基因,采用实时RT-PCR法测定qnrA的mRNA表达水平,通过启动子探针载体pKK232-8测定qnrA启动子强度,测定、比较启动子周边序列.结果 环丙沙星对仅含qnrA质粒pHS4及pUS5的接合子的MIC为0.094μg/ml及0.125μg/ml,同时携带qnrA及aac(6')-Ib-cr质粒pUS3及pUS6的接合子的环丙沙星MIC为0.25μg/ml及1.00μg/ml.含pUS6接合子qnrA相对表达水平较其他接合子高13~32.5倍,pUS6的qnrA上游序列启动子活性强,比另3个质粒高12倍,序列分析发现与pUS3比较,pUS6中qnrA转录启始位点与启始密码之间有7 bp(GTYAGCA)的缺失.结论 1个质粒同时携带qnrA和aac(6')-Ib-cr 2个耐药基因及qnrA高表达是导致接合子对环丙沙星的耐药性不同的原因.
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质粒介导16S rRNA甲基化酶在奇异变形杆菌临床分离株的流行情况研究
到目前为止,在革兰阴性杆菌中已发现AnnA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD和NpmA 6种16S rRNA甲基化酶,且编码这些酶的基因通常和超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因共处一个质粒上,通过质粒在不同的菌株之间播散~[1-4].RmtC型16S rRNA甲基化酶首次在奇异变形杆菌中被发现~[4],但16S rRNA甲基化酶在奇异变形杆菌中的流行情况还不清楚.本研究的目的是对从我院2004年5月至2007年9月临床标本中分离的198株奇异变形杆菌进行16SrRNA甲基化酶筛查,并对其转移机制进行研究,现将结果报道如下.
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产IMP-4和KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌PMQR基因检测及分子流行病学研究
产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌是近些年来导致医院内感染常见的条件致病菌之一,其耐药特征、产生碳青霉烯酶的基因型、质粒介导喹诺酮耐药基因( PMQR)的分布及流行的克隆株等会随地域的差异而不同。我们研究发现本地区24株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中均携带 KPC-2基因,还有5株携带IMP-4基因,且24株产酶菌株中均携带PMQR,包括 qnrS112株, qnrA111株, qnrB411株,其中3株同时携带有包括qnrS1、qnrA1、qnrB4基因,1株同时携带qnrS1、qnrA1、qnrB4、acc (6′)-cr 基因;另外17株携带有acc(6′)-Ib基因,其中9株为acc(6′)-Ib-cr基因,7株为acc(6′)-Ib-suzhou基因,1株为acc(6′)-Ib基因野生型。不携带碳青霉烯类酶基因肺炎克雷伯菌的携带1种PMQR基因以上的阳性率(23.7%)显著低于携带碳青霉烯类酶基因菌株(91.7%),差异有统计学意义(χ2=62.00,P<0.01)。
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阴沟肠杆菌喹诺酮类耐药qnr基因的发现
细菌对喹诺酮类药物的耐药机制主要是药物作用靶位的变异、细菌细胞膜通透性改变和/或主动外排系统过度表达导致药物在细菌体内浓度降低,这两种耐药机制由染色体介导引起,不具有水平传播性.近Martinez-Martinez L等发现了一个可编码喹诺酮耐药的多重耐药基因qnr,qnr基因是由可接合质粒介导的喹诺酮类耐药基因,作用机制是其编码的蛋白质对喹诺酮类药物靶位点的保护,从而导致药物治疗失败.本文对2003年9月-2005年6月解放军98医院分离的44株阴沟肠杆菌中qnr基因进行筛查.
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同一株菌两种新基因型CMY-22、TEM-144β-内酰胺酶的发现及其临床意义
大肠埃希菌是临床常见致病菌,也是院内获得性感染的重要病原菌.其耐药性的变迁和多重耐药的出现,主要与耐药基因编码酶有关,其中以质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和AmpC酶为重要.我们在近一项关于大肠埃希菌抗生素耐药相关基因的研究中,发现1株大肠埃希菌(ZY163)同时携带2种新型ESBL和AmpC酶,现报告如下.
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一株产SHV-5α型超广谱β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌检测
质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的产生引起了肠杆菌科细菌的耐药,ESBL能够水解氧亚氨基β-内酰胺类抗生素和氨曲南,并可被β-内酰胺酶抑制剂所抑制.截止2005年4月11日,在全球范围内至少已发现200多种ESBL.大多数ESBL来源于广谱酶TEM-1、TEM-2和SHV-1,系这些酶活性部位1个或多个位点的氨基酸突变所致,使酶活性部位的空间结构发生改变而扩大了水解底物范围,从而增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力.自Prinarakis于1996年首次报道了SHV-5α以来,这一β-内酰胺酶的相继报道不多.我们在研究蚌埠三院临床分离的产ESBL菌株时,从一株阴沟肠杆菌中检测到SHV-5α,现将结果报道如下.
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肠杆菌科细菌碳青霉烯类抗生素耐药检测方法的研究进展
碳青霉烯类抗生素是20世纪70年代后期在沙纳霉素基础上研发出来的一类抗菌谱广,抗菌活性强的非典型β-内酰胺类抗生素[1-2],对质粒介导的超广谱β-内酰胺酶( ESBLs )、染色体及质粒介导的头孢菌素酶( AmpC酶)均具有高度稳定性,已经成为治疗严重细菌感染主要的抗菌药物之一。碳青霉烯类抗生素通过抑制胞壁黏肽合成酶,即青霉素结合蛋白( PBPs ),从而阻碍细胞壁黏肽合成,使细菌胞壁缺损,菌体膨胀致使细菌胞质渗透压改变和细胞溶解而杀灭细菌[3],其对革兰阳性菌、革兰阴性菌和厌氧菌均有较强的抗菌活性[4]。随着该类抗生素的的广泛使用,临床上不断出现碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌,给临床抗感染治疗和医院内感染控制带来了极大困难。
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用PCR分析高水平耐四环素淋病奈瑟菌质粒类型
1985年美国首次分离出高水平质粒介导的耐四环素淋病奈瑟菌(hight-level plasmid mediated tetracycline-resistant N.gonorrhoea,TRNG)以来,在世界各地引起广泛流行,欧洲、非洲、亚洲、拉丁美洲等地区都有报道,有些地方TRNG在质粒介导型耐药菌株中分离率居首位.根据限制性内切酶谱将TRNG分为"荷兰型"和"美国型"两种[1],"美国型"与1600 bp的扩增产物相关,"荷兰型"与700 bp大小的扩增产物相关.1991年成都地区首次分离出TRNG[2],现已成为本地区流行的主要耐药菌株.我国过去对TRNG分型主要采用琼脂稀释法测定对四环素的小抑菌浓度或质粒抽提等方法,未对其携带的质粒类型进行基因分型.我们对1999年-2002年我所性病门诊收集的476株淋病奈瑟菌采用琼脂稀释法和聚合酶链反应对其携带的质粒类型进行检测和分析,现报告如下.
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Carba NP 试验用于检测产碳青霉烯酶菌株的研究
耐碳青霉烯类抗菌药物的菌株是目前全球抗感染治疗的大威胁[1],因其编码碳青霉烯酶的基因大多数由质粒介导,可在细菌之间水平转移,导致了菌株耐药基因的进化,使其在多个国家和地区之间暴发流行,并且部分产酶菌株低抑菌浓度(MIC)值达不到耐药水平,仅表现为对碳青霉烯类抗菌药物敏感性减低,容易引起人们的忽视。应用改良Hodge 试验[2]耗时长且对部分碳青霉烯酶敏感度低,已不能满足临床感染监控的需要。美国临床和实验室标准协会(CLSI)2015年药敏标准引入Carba NP 试验[3]的概念,以其操作简便、快速、灵敏度和特异度高的特点,很大程度上提高了产碳青霉烯酶菌株的检出率。本研究对比分析 Carba NP试验和改良 Hodge 试验检测碳青霉烯酶之间的差异,为临床实验室提供参考。
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细菌耐药机制的研究热点--整合子系统
在探讨细菌耐药机制的研究中,用基因突变和耐药性质粒介导细菌耐药性来解释似乎不够完全.近年来,细菌耐药机制--整合子(integron)系统得到研究者们的广泛注意[1],并取得了很大的进展.细菌通过整合子系统,通过整合酶的作用,捕获外来的耐药基因,并在位于整合子上游的启动子的作用下得到表达,使细菌具有耐药及多重耐药性.本文就近年国外相关文献及我们在对印度霍乱弧菌整合子分析的基础上,对整合子介导细菌耐药特性的研究进展进行简述.
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大肠埃希菌临床分离株质粒介导16S rRNA甲基化酶基因的检测及转移机制研究
近年来,发现一类质粒介导的16S rRNA甲基化酶,该酶能够保护细菌的30S核糖体的16s rRNA不与氨基糖苷类药物结合,造成其对包括阿贝卡星在内的所有的氨基糖苷类药物耐药,并且为高水平耐药~[1-4].目前,在革兰阴性杆菌中已发现ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD和NpmA 6种16SrRNA甲基化酶,且该酶通常和ESBL基因共处一个质粒上,通过质粒在不同的菌株之间播散~[2-3,5-6].我们在前期的研究中发现肺炎克雷伯菌临床分离株中存在rmtB和armA两种16S rRNA甲基化酶基因~[7],16S rRNA甲基化酶基因也可能存在于大肠埃希菌临床分离株中.在本研究中,我们对从温州医学院附属第一医院2006年1月至2008年7月临床标本中分离的680株大肠埃希菌进行了16S rRNA甲基化酶基因筛查,并对其转移机制进行了研究.
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杭州地区1998-2008年产ESBL的志贺菌基因型及分子流行病学研究
1999年Ahamed和Kundu~([1])在印度首次发现了志贺菌中存在SHV-11型ESBL.ESBL通常由质粒介导,对三代头孢和单环类抗生素有很高的活性,此后,世界各地均有志贺菌中ESBL的报道.
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住院患者肠道大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类耐药基因研究
大肠埃希菌是肠道内主要定植菌,是耐药基因的重要储存库~([1]),其耐药水平直接关系到临床感染株的耐药水平,另外,肠道正常定植的大肠埃希菌还可将所携带的耐药基因传递给致病性大肠埃希菌、沙门菌及志贺菌等不同菌属~[2].
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四环素高度耐药淋球菌的检测及基因分型
淋球菌对四环素高度耐药菌株(TRNG)是由质粒介导的耐药,该质粒由tetM基因编码.产β内酰胺酶淋球菌(PPNG)同样为质粒介导的对青霉素高度耐药.TRNG在世界各地流行[1-3],我国各地都有TRNG阳性率逐年增加的报道[4-5].