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冻存保护剂浓度对乳猪肝细胞-80℃低温保存的影响
目的:探索适宜于乳猪肝细胞-80℃长期低温保存的冻存保护剂浓度.方法:体外分离乳猪肝细胞,以含不同浓度二甲基亚砜(DMSO,浓度分别为50、100、150和200mL/L)的低温保存液-80C分别保存肝细胞30 d与60 d.复苏后接种培养,对其存活率、贴壁率、白蛋白及尿素合成能力等进行检测,并观察其形态结构变化.结果:不同DMSO浓度的低温保存液保存复苏后猪肝细胞的活力及形态学表现均有所不同,其中含50 mL/L DMSO低温保存液组保存效果差;100mL/L组次之;150 mL/L组佳.150 mL/L DMSO低温保存液组保存60 d肝细胞复苏后的存活率为81%,贴壁率是79%,较mL/L与100mL/LDMSO组有显著性差别(P＜0.05),150 mL/l DMSO组复苏后接种培养肝细胞的形态与未冻存组无明显差别,均保持较强的合成尿素及白蛋白能力.结论:150 mL/L DMSO浓度适合于乳猪肝细胞的-80℃长期超低温保存,保存时间对其活力无明显影响.冷冻保存;冻存保护剂;二甲基亚砜.
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几种辅食喂养对昆明小鼠胚胎的影响
为了提高昆明小鼠不同发育阶段的胚胎质量,在对成年昆明小鼠繁育研究中,对照组用全价颗粒饲料喂养,实验组分别添加麦芽、瓜籽和速补-18喂养,分别在D4、D8和出生后观察每组小鼠的妊娠阳性率,D4孕小鼠产生的平均囊胚数目、小鼠囊胚形态、贴壁率、扩展率及其子宫形态;D8和出生后观察胚胎着床数.结果表明,添加速补组的妊娠阳性率、囊胚孵化率、贴壁率、扩展率和胚胎着床数明显高于其它实验组.
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骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性
背景:随着近年来对骨质疏松机制研究的深入,研究者逐渐把研究重点放在了成骨细胞的来源骨髓问充质干细胞上.目的:对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,观察骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,分析骨质疏松的细胞病理学机制,以期为骨质疏松的防治提供一个有意义的药物靶标.方法:选用10月龄SD雌性大鼠去卵巢增龄3个月来复制骨质疏松模型,设假于术对照组.运用密度梯度离心法对两组大鼠骨髓间充质千细胞进行分离和体外培养,运用扫描电镜对培养的骨髓间充质干细胞进行形态学观察,并行生长曲线及贴擘率检测.结果与结论:骨质疏松大鼠的骨髓间充质干细胞增殖能力明显下降.与对照大鼠相比存在许多结构特征的差异.体外实验结果表明,骨质疏松大鼠骨髓间充质千细胞的体外增殖能力下降可能是骨质疏松的细胞病理学机制.
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人胎盘问充质干细胞在不同改性处理聚苯乙烯表面的生长效应
背景:人胎盘间充质干细胞(Placenta mesenchymal stem cells,PMSCs)是细胞治疗、再生医学以及免疫调节治疗的重要种子细胞,其培养表面的研究是关系优化PMSCs培养体系的重要课题.目的:观察磺化法、次大气压等离子技术和多聚赖氨酸包被技术改性的聚苯乙烯培养表面对人PMSCs体外培养的影响.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2007-03/2008-10在北京纵横洋洲医药生物技术公司生物塑料实验室完成.材料:聚苯乙烯3.5 cm2培养皿和24孔培养板由北京纵横洋洲医药生物技术有限公司提供.多聚赖氨酸购自美国Sigma公司.人正常分娩期胎盘由北京人民医院提供,并经产妇知情同意.方法:以磺化法、次大气压等离子技术、多聚赖氨酸包被技术改性聚苯乙烯培养表面,将体外分离的人胎盘小叶中有核细胞分别接种到不同改性处理的培养表面,贴擘法获得PMSCs克隆,传代培养.主要观察指标:观察不同改性处理的聚苯乙烯培养表面的表面张力;PMSCs在不同培养表面培养的原代培养克隆率、接种培养贴壁率;测定细胞生长曲线.结果:聚苯乙烯培养表面采用不同方法改性后,其表面张力:等离子组>多聚赖氨酸组>磺化组>对照组:培养表面表面张力越大,人PMSCs原代培养克隆率和继代培养贴壁率越大,而多聚赖氨酸包被的培养表面更有利于原代分离人PMSCs;培养表面表面张力的增加能有效缩短人PMSCs接种后恢复期.结论:鉴于多聚赖氨酸改性大幅增加了培养成本并有污染细胞的可能,建议采用多聚赖氨酸改性表面实施PMSCs原代培养,等离子改性表面实施PMSCs继代培养.
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鼠胚胎成纤维细胞饲养层及与鼠尾胶联合促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究
目的观察鼠胚胎成纤维细胞(MEF)与鼠尾胶及联合对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用.方法灌注法获取21 d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞数为1×109/L,并将细胞分别接种于预先铺敷鼠尾胶(鼠尾胶组)、MEF(MEF组)、铺敷鼠尾胶后接种MEF(联合组)和既不铺敷鼠尾胶也不接种MEF(对照组)的4组培养瓶中培养,培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.定时计数贴壁细胞数,计算贴壁率.结果随着培养时间从24～48 h,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高,48 h以后贴壁率开始下降;方差分析显示,同组内不同培养时间细胞贴壁率比较,差异有统计学意义(F=149.22、81.97、232.86、63.05,P＜0.01);q检验发现,同组内不同培养时间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01).相同培养时间,各组间培养细胞的贴壁率不都相同(F24=44.65,P＜0.01;F481071.489,P＜0.01;F72=4 208.35,P＜0.01);q检验分析显示,除培养24 h的MEF组与鼠尾胶组细胞的贴壁率差异无统计学意义外(q=0.792,P＞0.05),其余两两比较均有统计学意义(P＜0.01).结论MEF对日本血吸虫培养细胞的贴壁具有促进作用,MEF与鼠尾胶联合对培养细胞的贴壁具有协同作用.
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纤维蛋白粘合胶对人牙周膜细胞贴壁率的影响初探
目的:通过检测PDLCs在FG表面的贴壁率,间接的了解FG的生物相客性及其对PDLCs贴壁作用,为牙周治疗的应用提供依据.方法:通过对PDLC的原代培养,取第4～8代细胞用于实验,设立阴性对照组、对照组(e-PTFE膜)和实验组(FG组),分别对3组进行细胞计数,记录下各时间段下的贴壁率.结果:FG组的PDLCs在4h就已达到大贴壁率,而ePTFE膜组、阴性对照组则分别在10、12h才达到大贴壁率.16～24h内,FG组的贴壁率均显著高于其它2组(P<0.01).结论:实验结果显示,FG是一种生物相容性良好、安全可靠的组织粘合剂,具有显著的促进PDLCs贴附的作用,并可能成为细胞支架.在牙周治疗中具备广阔的应用前景.
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人正常宫颈上皮细胞的体外分离及细胞活性比较
目的:在传统上皮细胞消化分离方法基础上加以比较,探求一种佳宫颈上皮细胞的体外分离方法.方法:取10例新鲜的正常宫颈组织,将同一组织分成大小相同的3部分,采用3种不同的消化方法(胰蛋白酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化法)获取正常宫颈上皮角质细胞悬液,采用罗丹明B(SRB)法测定其细胞活性,同时比较其贴壁率.结果:胰蛋白酶组、Ⅰ型胶原酶组、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化组的细胞活性分别为0.9335、0.9544、0.9438,两两比较差异显著(P＜0.01);Ⅰ型胶原酶消化组的细胞贴壁率显著高于其他两组(P＜0.01).结论:Ⅰ型胶原酶消化法是一种理想的分离宫颈上皮细胞的方法.
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不同条件下细胞冻存效果比较
目的:通过比较不同条件下冻存细胞复苏后的贴壁率,提高细胞冻存复苏的存活率.方法:在细胞冻存时,同一种细胞设定不同的冻存条件,复苏后观察细胞贴壁率.结果:在三种不同条件下,血清和冻存程序的不同对细胞有较大影响;DMSO的浓度对细胞影响较小;结论:适当提高血清浓度,严格按照规定的冻存程序冻存可以提高细胞存活率.
