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实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义
目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性.方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH)39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5'非编码区(5'UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析.结果:本法检测H CV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P＜0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89,t=8.29,P＜0.05).结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性.
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促凝剂对乙型肝炎病毒实时荧光定量检测影响的评估
目的评估促凝剂对乙型肝炎病毒实时荧光定量检测的影响。方法随机采集2011年10月至2012年3月到西安市中心医院门诊的41例患者每人2管血样，分别为无添加剂普通管和促凝剂管，检测分离血清时间及效果。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA ，结果对数值采用SPSS11．5统计软件进行处理，并对促凝剂管标本进行精密度和抗干扰性能评价。结果促凝剂管分离血清平均时间为（4．73±0．86）min ，普通管为（14．46±2．27）min ，两组数据经配对 t检验，差异有统计学意义（P＜0．01）；促凝剂管乙型肝炎病毒DNA结果对数平均值为（3．86±2．99），普通管组对数平均值为（3．85±2．96），两组经配对 t检验，差异无统计学意义（P＞0．05），促凝剂管具有高精密度和抗干扰性能。结论促凝剂对乙型肝炎病毒实时荧光定量检测结果准确性没有影响，可减少报告周转时间，值得临床推广和应用。
