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siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌BxPC-3细胞放射敏感性的影响
目的:探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.方法:制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-Slug质粒载体,用脂质体转染法将siRNA-Slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组),G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞采用60Co γ射线对其进行照射3Gy.RT-PCR和Western blot检测不同组细胞经γ射线后的Slug、PUMA表达,MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果:实验组细胞内Slug基因被有效沉默;实验组细胞内PUMA蛋白和PUMA mRNA的相对值明显高于对照组(0.98±0.15 vs 0.32±0.08,1.03±0.16 vs 0.38±0.08,均P<0.05).实验组细胞生长抑制率和凋亡率分别高于对照组(37.46%±9.63% vs 2.13%±0.12%,32.4%±9.5% vs 3.47%±0.18%,均P<0.05).实验组细胞受到γ射线作用后,PUMA mRNA和PUMA蛋白表达明显增加,分别为1.26±0.18和1.23±0.18,生长抑制率和凋亡率增加,分别为78.4%±18.5%和73.3%±17.4%,与射线作用的对照组和阴性对照组比,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论:siRNA干扰Slug基因后,解除Slug对PUMA基因的抑制,增强BxPC-3对γ射线的敏感性.
关键词： 胰腺癌 P53正向凋亡上调因子 lug基因 RNA干扰 放射治疗 -
siRNA干扰slug基因表达对IEC-6细胞放射线敏感性影响
目的 探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制.方法 以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)的细胞进行X射线照射处理,24 h后,用Western blot法检测各组细胞的Slug和细胞P53正向凋亡上调因子(PUMA)蛋白的表达,CCK8法检测细胞在不同剂量X射线照射下的生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 实验组Slug蛋白表达与阴性对照组和空白对照组比较明显降低,PUMA蛋白表达明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有显著性(F=1 760、421,P＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,实验组细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(F=33.02,P＜0.01).在0～6 Gy剂量范围内,随着X线照射剂量的增加,各组细胞的增殖活性均降低(F=6.595～31.470,P＜0.05);在6 Gy剂量X线照射下,实验组细胞生长抑制率、早期+晚期凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增高,差异有统计学意义(F=47.700、33.020,P＜0.01).结论 siRNA干扰slug基因的表达能够使促凋亡的PUMA蛋白表达增加,从而增强IEC-6细胞对X射线的敏感性.
关键词： Slug基因 RNA干扰 P53正向凋亡上调因子 辐射耐受性
