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葛根素对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原和凋亡抑制蛋白表达的影响
目的:通过观察葛根素对培养的脐动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白(Survivin)表达的影响,探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制.方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,加入不同浓度葛根素与细胞孵育,采用免疫组化法检测血管平滑肌细胞的PCNA表达;提取RNA,采用Rt-PCR检测Survivin表达水平,并经核苷酸序列分析验证,灰度扫描测定Survivin/GAPDH(s/G)比率.结果:葛根素抑制血管平滑肌细胞的PCNA表达(P=0.0000);葛根素组Survivin/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(s/G)比率较对照组低.结论:葛根素具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用.
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miR-148 a下调Livin促进卵巢癌OVCAR-3细胞的凋亡
目的 观察高表达miR-148a对卵巢癌细胞系-3(OVCAR-3)细胞增殖及凋亡的影响,并深入研究miR-148a对凋亡抑制蛋白(Livin)基因的作用机制.方法 2016年10月—2017年12月在第四军医大学西京医院妇产科实验室进行实验.向培养的OVCAR-3细胞培养基中加入阴性对照(NC组)或miR-148a mimics(实验组),利用集落形成实验和CCK-8法检测转染miR-148a对OVCAR-3细胞增殖能力的影响;利用流式细胞计数法检测转染miR-148a后OVCAR-3细胞的凋亡情况;利用荧光素酶报告基因系统检测miR-148a对Livin mRNA 3'-UTR区稳定性的影响;利用Real time PCR(RT-PCR)和Western blot法检测Livin及Caspase-3的表达水平.结果 集落形成实验和CCK-8结果显示,与NC组相比,实验组OVCAR-3细胞转染miR-148a后克隆形成率明显下降,细胞增殖受到显著抑制,且呈剂量依赖效应(P<0.05);OVCAR-3细胞转染miR-148a后能显著增加细胞凋亡的水平(P<0.05);荧光素酶报告基因系统结果提示,miR-148a能够与Livin mRNA的3'-UTR区特异性结合;RT-PCR结果和Western blot结果提示转染miR-148a后,Livin表达水平明显降低,而Caspase-3的剪切水平显著升高(P<0.05).结论 miR-148a可以抑制卵巢癌细胞的细胞增殖,促进癌细胞的凋亡增加,其分子机制可能是通过抑制Livin的表达.
关键词： miR-148a:卵巢癌细胞系-3 增殖 凋亡 凋亡抑制蛋白基因
