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miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转化调控作用的研究
目的 探讨miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)间质转化的调控作用.方法 构建miR-328和antagomiR-328慢病毒,培养HUVECs分为正常对照组(NC)、甘露醇对照组(M T)、高浓度葡萄糖组(HG),miR-328、miR-328阴性组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328阴性组共7组.免疫荧光鉴定HUVECs间质转化;qRT-PCR检测miR-328;Western blot检测Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白.结果 高糖处理HUVECs呈CD31、α-SMA双阳性;HG组较NC组miR-328表达增高[(2.800±0.175)vs 1,P<0.05];HG组及miR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较NC组表达增加[(0.414±0.014)v s(0.403±0.016)v s(0.175±0.025),(0.501±0.014)v s(0.474±0.016)v s(0.185±0.014),P<0.05];antagomiR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较HG组表达减少[(0.227±0.012)vs(0.414±0.014),(0.222±0.015)vs(0.501±0.014),P<0.05].结论 高糖诱导HUVECs间质转化,miR-328表达增加;过表达miR-328诱导HUVECs间质转化,并具有相应分泌功能,而过表达antagomiR-328可抑制这一现象.
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转化生长因子-β1诱导人脐静脉内皮细胞间质转化的实验研究
目的 观察外源性转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞迁移和间质标志蛋白表达的影响及其发生的机制.方法 体外培养EA.by926,随机分为2组:(1)对照组:培养液中添加PBS;(2)TGF-β1组:培养液中添加10μg·L-1TGF-β1.倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,免疫荧光方法检测VE-钙黏蛋白、β-连环蛋白、波形蛋白和Twist表达变化,RT-PCR检测VE-钙黏蛋白、渡形蛋白和Twist基因表达变化.结果 对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β1组内皮细胞由铺路石样变为梭形.对照组培养24 h、48 h和72 h时吸光度A值分别为0.448 3±0.017 2、0.563 3±0.008 7、0.700 5±0.047 9,TGF-β1组分别为0.379 2±0.023 1、0.470 8±0.018 5、0.558 0±0.015 9,2组不同时间点问比较差异均有统计学意义(t=4.779、9.058、5.648,P均<0.05);划痕实验检测对照组和TGF-β1组内皮细胞迁移个数分别为每视野(47.17±8.28)个、(63.00±11.33)个,2组比较差异有统计学意义(t=2.763,P=0.02).免疫荧光检测可见TGF-β1组VE-钙黏蛋白和β-连环蛋白在细胞连接处表达减少,胞浆内游离的β-连环蛋白增多,波形蛋白和Twist表达增多.RT-PCR检测结果显示,对照组和TGF-β1组VE-钙黏蛋白目的 基因灰度值与内参GAPDH灰度值的比值分别为0.834 4±0.193 3、0.482 1±0.090 9,波形蛋白分别为0.968 7±0.163 2、1.440 4±0.150 2,Twist分别为0.231 6±0.078 5、2.162 6±0.295 6,2组比较差异均有统计学意义(t=4.038、9.933、15.465,P均<0.05).结论 TGF-β1促进内皮细胞迁移,诱导内皮细胞表达间质细胞标志蛋白,同时抑制VE-钙黏蛋白表达.TGF-β1介导的Twist表达增多,可能在内皮细胞表达间质标志蛋白中起着重要作用.
