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高浓度葡萄糖对PDX-1表达和胰岛素分泌功能的影响
目的 探讨高浓度葡萄糖(Glu)对PDX-1表达的影响及其与胰岛素(Ins)分泌的关系.方法 分别测定SD大鼠胰岛细胞基础和G1u刺激后Ins分泌量、细胞内Ins含量、细胞内PDX-1mRNA和蛋白的表达水平.结果 1.高糖刺激3天后,基础和Glu刺激后Ins分泌量、细胞内Ins含量及PDX-1蛋白表达水平均明显降低(P＜0.01).2.在高糖环境下,延长培养时间可显著加强高糖对PDX-1蛋白表达的抑制作用.3.纠正高糖环境3天后可部分逆转高糖对PDX-1蛋白表达的抑制作用.结论 高浓度Glu对PDX-1蛋白表达的抑制是Glu毒性作用的机制之一,纠正高糖3天后可部分逆转高糖对PDX-1蛋白表达的抑制作用,恢复Ins分泌功能.
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体外培养大鼠胰岛细胞的观察
目的:对大鼠胰岛细胞培养方法进行改进并对胰岛细胞进行体外观察.方法:选用3～4周龄Wistar大鼠胰腺,用200 U/ml的V型胶原酶消化,108 μm孔径尼龙筛网滤过消化产物后,得到大小较一致的细胞团,加入含有11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养液内,进行体外培养.利用倒置相差显微镜、透射电镜、免疫组织化学技术对胰岛β细胞形态和结构进行观察;应用放射免疫技术对胰岛素进行检测和分析.结果:胰岛细胞可以在体外培养17 d.培养初期,细胞形态及分泌功能较稳定;随培养时间延长,细胞逐渐破碎死亡,上清液内胰岛素水平也持续下降.结论:改进后的胰岛细胞培养方法简单可靠,细胞培养至48～72 h时,可用于实验研究.
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SD大鼠原代胰岛细胞分离、纯化及培养技术的改进
目的:探讨大鼠胰岛细胞分离、纯化及培养的方法,并评价其生物学功能.方法:选用8～10周龄健康SD大鼠,采用胆总管逆行注射预冷胶原酶P溶液,37℃水浴静止消化,30目不锈钢筛网过滤,Ficoll400非连续密度梯度离心纯化.分离后的胰岛用DTZ染色计算胰岛产量,胰岛素释放试验评价其生物学功能.结果:胰岛细胞分布于Ficoll400浓度为23％～20％和20％～11％的界面之间.DTZ染色呈红色细胞团,胰岛产量为(606±56)IEQ/胰腺.纯度高达80～90％,活率≥90％,胰岛素释放功能良好.结论:胶原酶P溶液原位消化,Ficoll400纯化是一种高效简便的胰岛分离方法,分离的胰岛细胞数量多、纯度高及活性好.
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高浓度葡萄糖、脂肪酸和糖皮质激素对PDX-1表达和胰岛素分泌功能的影响
SD大鼠胰岛细胞分别在含5.6 mmol/L葡萄糖、33 mmol/L葡萄糖、0.6 mmol/L软脂酸或20nmol/L地塞米松培养液中培养3 d,RIA测定基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌量,免疫组化法测定细胞内胰十二指肠同源盒蛋白1(PDX-1)蛋白表达和原位杂交法测定细胞内PDX-1 mRNA表达.结果 显示高浓度葡萄糖、脂肪酸和糖皮质激素对PDX-1蛋白表达和胰岛素分泌均有抑制作用.
关键词： 胰十二指肠同源盒蛋白1 胰岛素分泌 胰岛细胞培养 葡萄糖毒性作用 脂毒性作用 -
氯化锂对培养人胎胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的作用
微元量素锂对糖代谢的影响尚未完全明了.1924年,Weiss 等曾报道用锂盐治疗糖尿病可改善糖耐量,嗣后,关于锂盐与糖尿病、糖代谢关系的报道逐渐增多.Rossetti等认为,锂具有胰岛素样作用,并可改善胰岛素敏感性[1].胡敏等[2]观察小剂量6个月的锂处理能改善糖尿病中国地鼠糖代谢,而锂对胰岛素合成与分泌的作用意见不一.锂能减少中国地鼠胰岛β细胞内胰岛素(原)合成,抑制葡萄糖、 D860等刺激的大鼠胰腺胰岛素释放;有人认为,锂不能增加单个胰岛细胞胰岛素合成与分泌,但可促进培养的胎鼠胰岛细胞DNA的复制,使胰岛素合成与分泌增加[3]. 锂对人胎胰岛细胞胰岛未释放的作用尚未见报道.为了进一步探讨微元素锂对胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的作用,本研究用氯化锂处理培养的人胎胰岛细胞来观察锂对人胎胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的影响.
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一种改良的大鼠胰岛细胞原代培养方法
目的探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,并寻求进行体外干预实验的适条件.方法选用3、4周龄SD大鼠胰腺,用0.5 mg/mL的V型胶原酶逐级消化分离,80目尼龙筛网滤过消化产物后,加入含有11.1mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养液内,进行体外培养.DTZ染色、利用抗胰岛素抗体进行免疫细胞染色.应用放射免疫技术对培养液上清液中的胰岛素进行检测和分析.结果胰岛细胞可以在体外培养2周以上.培养初期,细胞形态及分泌功能较稳定.DTZ染色β细胞胞浆着色,为均一的猩红色.Insulin抗体染色β细胞胞浆着色,经DAB显色为棕黄色.随培养时间延长,胰岛素分泌逐渐下降,培养7 d内,胰岛素分泌较稳定.结论改良后的大鼠胰岛细胞培养方法简单可靠,细胞培养至3～7 d时,适合用于体外实验研究.
