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落新妇甙对大鼠心脏移植细胞凋亡的作用
目的 观察大鼠心脏移植急性排斥反应中的移植心脏的存活和心肌细胞的凋亡情况及落新妇甙对其影响.方法 进行36对SD-Wistar大鼠间的颈部心脏移植,术后将Wistar大鼠分为两组(各18只),落新妇甙组给予落新妇甙,对照组给予生理盐水.分别于术后第3、5和7天切取移植心脏,用苏木素-伊红(HE)染色和原位末端标记(TUNEL)技术检测移植心脏切片,进行排斥反应的病理分级并计算凋亡指数(AI),比较落新妇甙组和对照组间的差异.结果 (1)移植心脏的病理分级:移植后第3、5和7天对照组分别为0.77 ±0.31、1.99±0.62和3.44±0.54；落新妇甙组分别为0.37±0.42、0.88 ±0.20和1.04±0.33;两组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.01).(2)细胞凋亡主要发生于心肌细胞；落新妇甙能明显减少心肌细胞的凋亡,减轻移植心脏的组织损伤.移植后第3、5和7天对照组AI分别为4.03 ±1.32、8.52±1.97和9.73±6.21；落新妇甙组分别为0.87±1.11、2.53±2.49和4.71 ±2.99;两组比较差异均有统计学意义(均为P＜O.01).结论 在大鼠心脏移植模型中,落新妇甙能明显抑制心肌细胞凋亡,减轻移植心脏的急性排斥反应.
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落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇信号通路的影响
目的 探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/PKB)信号传导通路的影响.方法 分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105 /ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106/ml),前者作刺激细胞,后者作反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型.实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;3个实验组在对照组基础上,落新妇甙组加入落新妇甙(15 μg/ml);落新妇甙加PI3K激动剂组加入落新妇甙(15 μg/ml)和PI3K激动剂IL-8(20μg/ml);落新妇甙加PI3K抑制剂组加入落新妇甙(15 μg/ml)和PI3K抑制剂LY294002(20 μmol/L).TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况.Western blot法检测T细胞PI3K和Bcl-2蛋白表达情况.RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况.结果 落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[(74.2±11.7)%对(34.2±9.6)%,P＜0.01],PI3K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组(P＜0.01).落新妇甙加PI3K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组,PI3K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组(P＜0.01).落新妇甙加PI3K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K/PKB信号通路有关.
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落新妇甙对小鼠移植心肌细胞凋亡的抑制作用
目的 观察落新妇甙(Astilbin)对小鼠心脏移植急性排除反应中心肌细胞凋亡的抑制作用.方法 采用小鼠颈部心脏移植模型.共分3组:对照组供、受体均为C57小鼠;移植组供体为BALB/c小鼠,受体为C57小鼠;落新妇甙组在移植组基础上,心脏移植后每天以落新妇甙1 mg/kg灌胃.分别于术后第1、3、5、7天各取4只移植心脏,原位末端标记(TUNEL)法染色检测心肌细胞凋亡,以心肌细胞凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的百分比作为心肌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果 移植组心肌细胞于术后第1天即已出现凋亡,第3天明显增加,第7天达到高峰.落新妇甙组各时间点心肌细胞凋亡指数明显小于对应的移植组(P＜0.01).结论 落新妇甙对心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡有显著抑制作用.
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落新妇甙对小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用
目的 探讨落新妇甙对小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用.方法 采用小鼠颈部心脏移植模型.随机将心脏移植后的48只小鼠分为四组:A组心脏移植后每天用生理盐水1 ml灌胃,B组心脏移植后每天用环孢素A5mg/kg灌胃,C组心脏移植后每天用落新妇甙1ml/kg灌胃,D组心脏移植后每天用环孢素A2.5mg/kg及落新妇甙1ml/kg灌胃.观察移植心脏的存活时间及心脏跳动情况.结果 B组、C组及D组移植心脏存活时间均较A组显著延长(P＜0.01);D组移植心脏存活时间长,优于C组(P＜0.05)和B组(P＜0.01).结论 落新妇甙对心脏移植排斥反应有较强的抑制作用,并与环孢素A有协同作用.
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土茯苓及其制剂中落新妇甙含量测定
采用紫外分光光度法对土茯苓中落新妇甙含量进行测定.实验结果表明,土茯苓中落新妇甙的平均含量为0.0275%,而银屑冲剂(含土茯苓)则未测出落新妇甙.
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落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用
目的:探讨落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用.方法:采用大鼠左侧单肺移植模型.随机将肺移植后的40只大鼠分为4组:A组肺移植后用生理盐水(1ml/天)灌胃,B组肺移植后用环孢素A (5 mg/kg/天)灌胃,C组肺移植后用落新妇甙(1 ml/kg/天)灌胃,D组肺移植后用环孢素A (2.5 mg/kg/天)及落新妇甙(1 ml/kg/天)灌胃.术后第10天切取移植肺观察肺急性排斥反应分级情况.结果:B组、C组及D组移植肺排斥反应分级均低于A组(P＜0.05～0.01);D组移植肺急性排斥反应轻,优于C组(P＜0.05)和B组(P＜0.01).结论:落新妇甙对肺移植排斥反应有较强的抑制作用,并与环孢素A有协同作用.
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落新妇甙诱导混合细胞培养中活化的T细胞凋亡及其机制
目的 探讨落新妇甙对混合细胞培养中活化的T细胞产生细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA 4)表达的影响.方法 分离BALB/c小鼠心肌细胞(2×105/ml)和C57BL,/6小鼠脾细胞(1×106/ml),前者作为刺激细胞,后者作为反应细胞,进行混合细胞培养.实验分为3组:(1)对照组,混合细胞培养采用RPMI-1640培养液;(2)落新妇甙组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml;(3)落新妇甙+CTLA-4单克隆抗体组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml和CTLA-4单克隆抗体9H10 30μg/ml.原位末端标记(TUNEL)法检测混合细胞培养中T淋巴细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)法检测T细胞CTLA 4表达情况.结果 落新妇甙组的T细胞凋亡指数明显高于对照组(73.4%±12.5%vs 35.1%±9.2%,P＜0.01),T细胞CTLA-4的表达亦显著高于对照组(P＜0.01).落新妇甙加CTLA-4单克隆抗体组的T细胞凋亡指数和CTLA-4表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 落新妇甙诱导心肌细胞排斥反应中活化的T细胞凋亡可能与其增强T细胞中CTLA-4的表达有关.
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落新妇甙对肝缺血再灌注损伤细胞因子信号转导抑制分子1表达的影响
目的 观察落新妇甙对肝脏缺血再灌注损伤中对炎症信号通路的影响,探讨其缺血再灌注保护作用的分子机制.方法 C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(I/R)、落新妇甙小剂量(10 mg/kg)干预组和落新妇甙大剂量(40 mg/kg)干预组.缺血前24 h和1h干预组小鼠腹腔注射分别给予10 mg/kg或40 mg/kg落新妇甙,建立肝左、中叶70％部分肝缺血再灌注模型,模型组和假手术组给予同体积的生理盐水.小鼠肝脏左叶缺血90 min、再灌注6h后各实验组采集血液和肝脏组织样本.Western blot检测肝组织中细胞因子信号转导抑制分子1(SOCS-1)、白细胞介素(IL)-10蛋白含量,半定量逆转录-聚合酶链反应(SqRT-PCR)检测上述分子mRNA表达.结果 落新妇甙小、大剂量干预组肝组织中SOCS-1、IL-10蛋白表达与I/R模型对照组比较均逐渐升高,与SqRT-PCR结果相符(P＜0.05).结论 落新妇甙干预能促进缺血再灌注损伤肝组织中IL-10蛋白及mRNA的高表达,从而起到抑制炎症的作用;落新妇甙干预能促进缺血再灌注损伤肝组织SOCS-1蛋白和mRNA的表达,显示其可能通过上调SOCS-1负调节通路,产生抑制炎症的作用.
关键词： 落新妇甙 肝缺血 再灌注损伤 白细胞介素-10 细胞因子信号转导抑制分子1 -
落新妇甙诱导小鼠心脏移植体外排斥反应中活化T细胞凋亡
众多研究结果显示,T淋巴细胞在器官移植急性排斥反应中起核心作用.T淋巴细胞必须在其达到活化状态后才能发挥免疫效应,因此目前许多免疫抑制剂都是通过阻止T淋巴细胞活化而发挥抗急性排斥效应的.
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落新妇甙对热缺血再灌注损伤肝脏肿瘤坏死因子α与白细胞介素-10表达的影响
目的 观察落新妇甙对热缺血再灌注(I/R)损伤肝脏Th1、Th2型细胞因子表达的影响. 方法 C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组、模型组,落新妇甙小剂量(10 mg/kg)干预组和大剂量(40mg,/kg)干预组.干预组小鼠于缺血前24h和1 h分别给予10mg/kg或40mg/kg的落新妇甙腹腔注射,建立70%部分肝I/R模型.收集肝组织标本,Western blot检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)-10蛋白含量,RT-PCR检测肝组织TNF α、IL-10 mRNA的水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 与I/R模型对照组比较,小、大剂量落新妇甙干预组肝组织中TNF α蛋白表达水平依次降低,与TNF α mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为1.74±O.12与1.56±0.09、0.82±0.12,P值均<0.05);而IL-10蛋白表达水平依次升高,与IL-10 mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为0.96±0.08与1.11±0.17、1.47±0.08,P值均<0.05).结论 落新妇甙干预能抑制I/R损伤肝组织中Th1型细胞因子TNFα的高表达,同时促进Th2型细胞因子IL-10的表达.
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落新妇甙对肺移植术后急性排斥反应的作用
目的 探讨落新妇甙对大鼠肺移植后机体急性排斥反应的影响和机制,以明确落新妇甙对大鼠肺移植急性排斥反应的作用.方法 建立大鼠原位肺移植模型,术后将60只受体大鼠随机分为两组,对照组:术后用生理盐水1ml/d灌胃,实验组:术后用落新妇甙1ml/kg*d灌胃.观察肺移植后大鼠的存活时间、大鼠脾细胞T淋巴细胞转化率、脾淋巴细胞白细胞介素2(IL-2)的活性以及外周血中活化T淋巴细胞凋亡情况.在电子显微镜下观察肺血管超微结构变化.结果 实验组大鼠肺移植后存活时间较对照组明显延长(25.4±2.1d vs. 13.4±1.2d;t=2.042, P＜0.05).实验组脾细胞T淋巴细胞转化率较对照组明显降低(23 465.8±8 783.4 cpm vs. 74 567.3±12 874.6 cpm;t=2.284,P＜0.05);实验组移植大鼠脾淋巴细胞IL-2活性较对照组明显降低(4.25±2.65U/ml vs. 23.46±1.82U/ml;t=3.165, P＜0.01).实验组能有效地诱导急性排斥反应中活化T淋巴细胞凋亡.实验组肺组织超微结构损伤较对照组减轻.结论 落新妇甙通过下调IL-2产生,诱导活化T淋巴细胞凋亡,抑制T淋巴细胞增殖分化,广泛抑制了以T淋巴细胞为主的肺移植术后急性排斥反应,从而延长肺移植大鼠的存活时间.
