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胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸对慢性支气管哮喘小鼠气道重塑的影响
目的 研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)能否预防或减轻慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑的发生.方法 40只雌性清洁级C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组,每组10只.(1)慢性哮喘组(A组):分别于第1、14天小鼠腹腔注射1 ml致敏液[卵蛋白(OVA,10 μg)+氢氧化铝凝胶(100 μg)];从第21天开始雾化吸入2.5%OVA溶液,每次30 min,每周3次,连续8周.(2)CpG-ODN干预组(B组):在OVA致敏的同时给予浓度为60μg/ml的CpG-ODN腹腔注射1 ml共2次,以后每2周腹腔注射1次共4次.(3)GpC-ODN对照组(C组):将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶(GpC,剂量及用法同CpG-ODN)作为对照.(4)生理盐水(NS)对照组(D组):给予NS进行致敏(每次1 ml腹腔注射)和激发(用NS雾化吸入).在末次激发24 h后所有小鼠取血测嗜酸粒细胞(EOS)数和血清IgE;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)做细胞分类计数,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清液中白细胞介素13(IL-13)和转化生长因子β1(TGF-β1)的浓度.取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色和Masson三色染色,用抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体和抗TGF-β1抗体行免疫组化染色.结果 A组外周血EOS计数为(89±10)×104/ml、血清IgE为(279±53)ng/ml,BALF中EOS计数和分类分别为(6.30±1.30)×105/ml、0.181±0.030,A组IL-13浓度为(4 015±361)pg/ml、TGF-β1浓度为(356±64)pg/ml,以上数值与D组比较差异有统计学意义(t值分别为24.0、15.7、14.7、18.4、12.0和18.9,P均＜0.01);A组Masson三色染色、α-SMA、TGF-β1阳性染色面积百分比[分别为(29.7±4.2)%、(45±7)%、(34±4)%]与D组比较差异也有统计学意义(t值分别为18.0、15.6和17.9,P均＜0.01).应用CpG-ODN干预后(B组)的Masson三色染色、α-SMA、TGF-β1阳性染色面积百分比[分别为(13.8±3.2)%、(25±3)%、(18士4)%]与A组比较差异也有统计学意义(t值分别为9.5、8.9、9.8,P均＜0.05).结论 应用CpG-ODN干预慢性哮喘模型,不仅能抑制Th2细胞反应和EOS肺浸润,还能抑制气道重塑的发生和发展,它可能是通过抑制TGF-β1、IL-13等因子而抑制气道重塑的.
关键词： 哮喘 气道重塑 炎症 小鼠 CpG-寡脱氧核苷酸 -
CpG寡脱氧核苷酸对慢性哮喘小鼠模型气道炎症的预防作用
目的 研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides,CPG-ODN)能否预防或减轻慢性哮喘小鼠气道炎症的发生.方法 40只雌性C57BL/6小鼠随机均分为4组,A组(慢性哮喘组)、B组(CpG-ODN干预组)和C组(GpC-ODN对照组)分别腹腔注射卵蛋白致敏,然后用卵蛋白雾化吸入激发以制作慢性哮喘模型,D组(生理盐水对照组)用生理盐水进行致敏和激发.B组在致敏同时(d1,d14)和激发阶段(每2周1次)分别给予60 μg/mL CpG-ODN腹腔注射,共6次.C组将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶(GpC)作为对照.在末次激发24 h后,取血测嗜酸粒细胞(eosinophil,EOS)数,血清IgE、IgG1和IgG2α;收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)作细胞分类计数;测定肺组织中白介素-4(interleukin-4,IL-4)、白介素-13(interleukin-13,IL-13)和γ-干扰素的mRNA(interferon-γ,IFN-γ)表达量;以及肺组织病理学检查.结果 A组外周血EOS数[(89±10)×104 /mL]、血清IgE值[(279±53)ng/mL)、IgG1(A值2.151±0.628)、IgG2α(A值0.772±0.245)、BALF中EOS[(6.3±1.3)]×105 /mL)及百分比[(18.1±3.0)%]较D组明显增高(P＜0.01);且肺组织中IL-4、IL-13和IFN-γ等细胞因子mRNA表达量[(分别为(5.72±3.89)×10-2、(9.45±5.91)×10-2和(3.23±1.69)×10-2)]也明显高于D组(P＜0.05).用CpG-ODN干预后(B组),除IgG2α(A值1.186±0.414)和IFN-γmRNA表达量[(18.91±9.85)×10-2]增高外(P＜0.05),其余指标均低于A组(P＜0.05).C组的上述各指标与A组相比差异均无显著性(P＞0.05).结论 CpG-ODN对小剂量OVA反复激发所致的慢性气道炎症有一定的预防作用.
关键词： 慢性哮喘 气道炎症 CpG-寡脱氧核苷酸 小鼠 -
应用CpG-寡脱氧核苷酸免疫刺激进行慢性淋巴细胞白血病的染色体研究
目的 验证CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)免疫刺激是否能提高B细胞慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)核型异常检出率.方法 抽取57例B-CLL患者的骨髓或外周血,分别加入CpG-ODN DSP30+白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、美洲商陆(pokeweed,PWM)和IL-2后进行培养,5 d后按常规收获并制备染色体,应用R显带技术进行核型分析.应用Cen12、D13S25、Rb1、ATM、P53、MYB和IgH探针对其中19例核型正常的患者进行组合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测.抽提骨髓或外周血单个核细胞基因组DNA,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin variable heavy chain,IgVH)并进行DNA序列分析.应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测白血病细胞的CD38和ZAP70表达.结果 DSP30+IL-2组的异常核型检出率(43.85%)明显高于PHA组(15.09%)、PWM组(17.31%)和IL-2组(3.13%)(P<0.01).DSP30+IL-2组共检出畸变52种.数目异常以+12或+12伴其它异常为多见(9例);结构异常以易位为多见(14例),包括平衡易位11例和不平衡易位3例,前者中又以14q32重排为多见(7例).FISH显示19例正常核型患者中13例(68.42%)显示1种或多种异常,包括12三体和p53缺失各l例,IgH重排和部分缺失各1例,13q14.3缺失11例,其中5例合并RB1缺失,1例合并RB1部分缺失,未见ATM和MYB缺失者.PCR揭示10/18例有IgVH突变(55.55%).FCM检测揭示10/45例CD38+,35/45例CD38-,11/27例ZAP70+,16/27例ZAP70-.同时进行CD38和ZAP70检测的26例中,5例为CD38+ZAP70+,13例为CD38-ZAP70-,2例为CD38+ZAP70-,6例为CD38-ZAP70+.统计学分析揭示复杂核型异常与IgVH无突变之间有相关性,但未发现CD38或ZAP70表达与核型之间有相关性.结论 CpG-ODN可显著提高CLL的核型异常特别是各种平衡和不平衡易位的检出率;FISH是常规核型分析的重要补充,二者结合能提供更全面的遗传学信息.
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CD40配体和CpG-寡脱氧核苷酸在慢性淋巴细胞白血病染色体研究中的应用
20世纪90年代以来,德国学者分别应用CD40配体(CD40L)和CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)刺激慢性淋巴细胞白血病(CLL)的白血病细胞增殖,明显提高了有丝分裂指数和异常核型检出率,特别是发现新的预后不良亚型各种平衡和不平衡易位.CpG-ODN和CD40L相比,技术十分简便,有可能取代间期荧光原位杂交(FISH)技术,从而成为CLL染色体研究的标准方法.
关键词： 慢性淋巴细胞白血病 染色体 荧光原位杂交 CD40配体 CpG-寡脱氧核苷酸
