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代谢综合征患者过氧化物酶体增殖物激活受体δ+294T/C基因多态性与血脂、肥胖和左室肥厚的关系
目的探讨代谢综合征(MS)患者过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)+294T/C基因多态性与血脂、肥胖和左室肥厚的关系.方法检测300例MS、174例高血压病(EH)和143例2型糖尿病(DM)患者的体重指数(BMI)、腰围、血压、血脂、空腹血糖(FBG)和空腹血浆胰岛素(FINS).MS诊断根据1999年WHO亚太诊断标准,其中389例患者行超声心动图检测心脏结构改变,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法测定PPARδ+294T/C基因多态性.结果PPARδ+294T/C基因多态性各基因型频率分布组间比较差异无统计学意义.MS组血浆总胆固醇、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和BMI明显高于DM组.MS组和EH组的左室重量(LVM)、左室重量指数(LVMI)和左室肥厚罹患率均明显高于DM组.MS组CC型血浆总胆固醇和LDL-C水平明显高于TT型和TC型[总胆固醇:CC型(6.13±1.86)mmol/L比TC型(5.14±1.10)mmol/L或TT型(4.99±1.42 mmol/L),P<0.05或P<0.01;LDL-C:CC型(3.82±1.52)mmol/L比TC型(3.14±0.88)mmol/L或TT型(2.90±0.87)mmol/L,P<0.05或P<0.01].分析PPARδ各基因型与LVMI和BMI的关系,发现MS组C等位基因携带者(CC+TC)LVMI和BMI明显高于TT型[LVMI:CC+TC(46±10)g/m2.7 比TT(44±10)g/m2.7;BMI:CC+TC(26±3)kg/m2 比TT(25±3)kg/m2,P<0.05].结论 MS患者PPARδ+294T/C基因多态性与肥胖和脂质紊乱关系密切,C等位基因携带者较TT基因型患者左室重构明显.
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以Lipid A为靶点拮抗内毒素中药的筛选
目的:利用生物传感器跟踪技术从抗炎中药中筛选出具有拮抗内毒素的中药,为进一步对中药拮抗内毒素活性成分的分离纯化提供实验依据.方法:将革兰阴性细菌的脂质A(Lipid A)包被于生物传感器的非衍生板建立靶点,跟踪测定赤芍、大黄、黄芩等78种中药的水提物和醇提物与Lipid A的结合活性,再将筛选出的中药去鞣质后与定量的内毒素(LPS,20、50 ng·ml-1)37 ℃孵育30 min后,测定孵育后的样品与Lipid A的结合情况,以评价样品内的活性物质含量.结果:在所筛选的78种中药中有12种中药的水提物与Lipid A具有较高的亲和活性,在这12种中药中有6种中药的醇提物与Lipid A也具有较高的亲和活性;通过对所筛选出的12种中药的水提物去除鞣质后与LPS的消耗实验,发现所筛选出的12种中药均含有除鞣质以外的与lipid A具有特异性结合的物质,并且12种中药中能与Lipid A发生特异性结合作用的活性物质含量存在较大的差异.结论:生物传感器跟踪技术是一种快速、准确、有效的筛选平台,筛选出的12种中药均含有非鞣质类能与lipid A发生特异性结合作用的物质,为进一步对12种中药抗内毒素有效部位或单体的分离提供了重要的实验依据.
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脂质A高亲和噬菌体融合肽的筛选及鉴定
以脂质A为靶标分子,对噬菌体展示环七肽库进行4轮亲合筛选,ELISA结合实验鉴定阳性克隆,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定,推导短肽的氨基酸残基序列.结果 4轮筛选后,随机挑取的20个噬菌体克隆中14个可与脂质A结合.测序发现这14个阳性克隆融合多肽中的8个序列一致,均为QTPLSST.认为QTPLSST是一个可与脂质A高亲力结合的噬菌体多肽.该肽序列能否抑制脂多糖的活性有待进一步研究.
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应用生物传感器技术筛选拮抗革兰阴性菌主要病原分子的中药
目的 建立以CpG DNA和脂质A为靶点的生物传感器筛选平台,从传统抗炎中药中筛选同时具有拮抗细菌基因组DNA及脂质A活性的中药并按其活性物质的含量进行排序.方法 将CpG DNA和脂质A分别包被于生物传感器的生物素样品池和非衍生板以建立靶点,测定114种中药提取液去鞣质后与CpG DNA的亲和力;选择亲和力较高的35种药物与定量CpG DNA(16.5 μg/mL) 37 ℃混合孵育30 min,再测定其与CpG DNA的亲和力,以评价中药提取液中活性物质的含量.选择亲和力较高的中药与脂质A反应进行再次筛选.结果 114种中药中,侧柏叶、薄荷、半枝莲等35种中药与CpG DNA具有较高亲和力(>100 RU);地骨皮、侧柏叶等14种中药中,与CpG DNA特异性结合的活性物质,测得含量均较高.经另一检测靶点脂质A再次筛选后得到8种特异性亲和力较高的备选中药.结论 应用生物传感器跟踪检测技术筛选具有结合革兰阴性菌主要致病分子作用的中药具有可行性.
