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理阿诺碱增强雷帕霉素诱导的内皮生长晕细胞功能并降低内皮型一氧化氮合酶( Thr495)的磷酸化水平
目的 探讨理阿诺碱（ryanodine）对雷帕霉素（rapamycin）诱导的内皮生长晕细胞（endothelial outgrowth cell,EOC）功能及其相关总内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及eNOS( Thr495)的磷酸化水平。方法 密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，培养并扩增EOC，免疫组化法、荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。实验分为对照组、10 nmol/L rapamycin组（rapamycin组）、10μmol/L ryanodine预处理1h再加10 nmol/L的rapamycin组（ryanodine+ rapamycin组）、10 μmol/Lryanodine组（ryanodine组），各处理组与EOC作用24h，CCK8检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移能力。用特异性的总eNOS抗体及磷酸化的eNOS( Thr495)[p-eNOS（Thr495）]抗体的蛋白免疫印迹法( Western blot)检测总eNOS蛋白表达及eNOS( Thr495)磷酸化水平。结果 rapamycin组EOC的增殖及迁移均低于对照组（P均＜0.05），eNOS( Thr495)磷酸化水平高于对照组(P＜0.05)，总eNOS蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义。Ryanodine+ rapamycin组EOC的增殖及迁移均高于rapamycin组（P均＜0.05），eNOS( Thr495)磷酸化水平低于rapamycin组(P＜0.05)，总eNOS蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义。Ryanodine组EOC的增殖、迁移及总eNOS及eNOS( Thr495)磷酸化水平与对照组比较差异均无统计学意义。结论 rapamycin可抑制EOC的增殖及迁移，增强eNOS(Thr495)磷酸化水平。Ryanodine可以改善rapamycin诱导的EOC增殖及迁移能力的抑制，降低eNOS(Thr495)磷酸化水平。
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理阿诺碱对雷帕霉素诱导的内皮生长晕细胞功能抑制的保护作用
目的 探讨理阿诺碱对雷帕霉素诱导的内皮生长晕细胞(EOCs)功能抑制的影响.方法 密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,培养并扩增EOCs,免疫组化法、荧光染色法鉴定其内皮细胞特性.分别加雷帕霉素、理阿诺碱、理阿诺碱预处理1h再加雷帕霉素,与EOCs作用24h,CCK8检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,并在倒置显微镜下检测细胞的黏附能力.结果 雷帕霉素抑制EOCs的增殖、迁移、黏附能力(P＜0.05).理阿诺碱预处理1h能改善雷帕霉素对EOCs的增殖、迁移、黏附的抑制作用(P＜0.05),理阿诺碱单独作用对EOCs的增殖、迁移、黏附无影响(P ＞0.05).结论 雷帕霉素抑制EOCs的增殖、迁移、黏附能力; 理阿诺碱可以改善雷帕霉素诱导的对体外培养的EOCs增殖、迁移、黏附的抑制作用.
