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乙醇及其代谢产物对新生大鼠原代培养心房肌细胞乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3.1蛋白表达的影响
目的 明确乙醇及其代谢产物乙醛对新生SD大鼠原代心房肌细胞乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3.1蛋白表达的影响,并探讨该通道及乙醛在急性乙醇中毒引发心律失常的过程中所发挥的效应.方法 采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶提取并培养150只新生SD大鼠原代心房肌细胞,并采用免疫荧光法进行肌钙蛋白Ⅰ鉴定.采用细胞计数套件-8(CCK-8)法分别测定200 ～ 800 mmol/L乙醇及50～ 500 μmol/L乙醛处理24 h后细胞的生存率,以确定导致新生SD大鼠原代心房肌细胞凋亡所需的乙醛及乙醇浓度.建立以大非凋亡浓度(200 mmol/L)的乙醇处理24h及相应剂量(100 μmol/L)乙醛处理24 h的新生SD大鼠原代心房肌细胞模型.采用Western blot法检测乙醇处理组、乙醛处理组及对照组心房肌细胞Kir3.1蛋白的表达情况,并对结果进行统计学分析.结果 (1)成功培养新生SD大鼠原代心房肌细胞,细胞免疫荧光鉴定所培养细胞为心肌细胞,且90％以上细胞肌钙蛋白Ⅰ染色阳性.(2) CCK-8法测定显示400 mmol/L以上的乙醇处理组的心肌细胞生存率明显低于对照组(P＜0.05),而200 mmol/L及以下的乙醇处理组心肌细胞生存率与对照组相比差异无统计学意义(P ＞0.05);400 μmol/L以上的乙醛处理组的心肌细胞生存率明显低予对照组(P＜0.05),而350 μmol/L及以下的乙醛处理组心肌细胞生存率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).(3)Western blot检测显示200 mmol/L乙醇及100 μmol/L的乙醛处理24h的新生SD大鼠原代房心肌细胞Kir3.1蛋白表达分别高于对照组(44.52±23.07)％及(45.04±22.01)％ (P ＜0.01),而乙醇组与乙醛组之间Kir3.1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 急性乙醇及乙醛处理均能够明显上调乙酰胆碱敏感型钾通道Kir3.1蛋白的表达.
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鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节GIRK1表达的影响
目的 评价鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经痛大鼠背根神经节G蛋白偶联内向整流钾通道1(GIRK1)表达的影响.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠144只,8～10周龄,体重200～ 220 g,采用随机数字表法分为4组(n=36):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、糖尿病神经痛组(DNP组)和糖尿病神经痛+右美托咪定组(DD组).采用腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病神经痛模型.D组和DD组于注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液或链脲佐菌素后14d时鞘内注射右美托咪定1.5 μg/kg,C组鞘内注射等容量生理盐水.于注射链脲佐菌素前(T0)、注射链脲佐菌素后14d(T1)、鞘内注射后2、4和6h(T2～4)时测定机械痛阈,于T2～4时测定痛阈后处死大鼠取脊髓背根神经节,采用免疫荧光法检测GIRK1阳性细胞数目,Western blot法检测GIRK1的表达.结果 与DNP组比较,DD组T2～4时机械痛阈升高,脊髓背根神经节GIRK1阳性细胞计数增加,GIRKI表达上调(P＜0.05);与D组比较,DD组T2～4时脊髓背根神经节GIRK1阳性细胞计数增加,GIRK1表达上调(P＜0.05);与C组比较,DNP组T1～4时机械痛阈降低(P＜0.05).结论 鞘内注射右美托咪定通过上调背根神经节GIRK1表达减轻大鼠糖尿病神经痛.
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G蛋白偶联内向整流钾通道亚基2 mRNA在颞叶癫疒间大鼠海马内的表达
目的探讨G蛋白偶联内向整流钾通道亚基2(GIRK 2)在颞叶癫癎大鼠海马内的表达变化.方法应用腹腔注射海人酸致癎大鼠,采用原位杂交法检测大鼠海马GIRK 2 mRNA的表达.结果 GIRK 2 mRNA在癫癎大鼠海马齿状回表达增加,与正常对照组相比差异有显著性( P<0.01).结论癫癎大鼠海马内GIRK2增高是机体对神经元网络过度兴奋的代偿反应.
关键词： 癫癎 G蛋白偶联内向整流钾通道 海马
