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PKC-delta激活报告分子文献资料
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甲状旁腺素通过磷脂酶C非依赖途径激活蛋白激酶C
目的 利用基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术的检测PKC激活或PKC-delta激活的报告分子来确定PTH是否可以通过PLC非依赖途径激活PKC和PKC -delta.方法 将表达PKC激活报告分子(CKAR)的质粒和表达PKC-delta激活报告分子的质粒转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并以此判断佛波酯(TPA)是否激活PKC和PKC-delta.将表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒共转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并判断PTH( 1-34)、G1R19(1-34)和0.1％的三氟乙酸(TFA)对PKC和PKC-delta的作用.结果 在转染CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,TPA均使青色荧光与黄色荧光的强度之比(C/Y)增加.在共转染PTH1R质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,PTH( 1-34)和G1R19 (1-34)均增加了C/Y的值,而0.1％TFA未引起C/Y的改变.结论 PTH与PTHR1结合后通过PLC非依赖途径激活PKC/PKC-delta.
