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钙结合蛋白A10文献资料
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S100A10基因沉默对人软骨细胞内核转录因子NF-κB活性的影响
目的：针对人S100A10基因设计siRNA序列并构建shRNA表达载体；重组载体转染人关节软骨（HCs）细胞，观察细胞内S100A10基因表达及其对细胞内核转录因子κB（NF-κB）活性的影响。方法登陆美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库，根据人钙结合蛋白A10（S100A10）基因信息，设计3条针对其编码区（ CDS）区的小干扰RNA（ siRNA）序列。根据设计的siRNA序列，设计两条互补的shRNA序列，构建shRNA重组表达载体；阳离子脂质体法转染shRNA重组表达载体到HCs细胞，转染后48 h，收集细胞，提取细胞总 RNA及总蛋白，使用实时PCR（ RT-PCR）及蛋白质印迹法（ Western blot）的方法检测转染后细胞中S100A10 mRNA及蛋白相对含量；Western blot检测细胞内NF-κB的P65及P50亚基磷酸化。数据统计使用单因素方差分析。结果成功设计siRNA序列并成功构建了shRNA表达载体；mRNA及蛋白含量检测结果显示，三条siRNA序列对目的基因均有沉默效果，其中1号siRNA序列为-有效，其转染后48 h，细胞内mRNA及蛋白含量相比较未转染组细胞，分别下降了74.2％和76.4％，差异均有统计学意义（t ＝5.21，P＜0.01）；HCs 细胞内S100A10基因沉默，能够明显抑制核转录因子NF-κB活性，与对照组比较，P65及P50亚基磷酸化明显减弱（ t＝3.02，P＜0.01）。结论 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs细胞内NF-κB活性。
关键词： 钙结合蛋白A10 RNA干扰 NF-kappa B
