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siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞5型磷酸二酯酶表达的抑制作用
目的观察小干扰RNA(siRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞5型磷酸二酯酶(PDE5)表达的抑制作用,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据.方法使用美国Ambion公司提供的设计软件设计人PDE5基因的siRNA序列,并合成3对PDE5 siRNA和1对阴性对照siRNA,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞.RT-PCR法半定量检测siRNA对PDE5 mRNA表达的抑制作用;Western blot法检测海绵体平滑肌细胞PDE5蛋白表达水平. 结果siRNA1、siRNA2和siRNA3转染后人阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5 mRNA表达分别下降58.2%、14.9%和11.9%;PDE5蛋白表达量下降约70.5%、19.8%和17.3%;阴性对照siRNA组未引起PDE5 mRNA和蛋白表达的变化. 结论体外化学合成的PDE5 siRNA能特异有效地下调PDE5基因表达,不同序列特异性的siRNA下调PDE5基因表达的能力不同,为ED的基因治疗提供了新思路.
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PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Westernblot法检测转染后PDE5基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.
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PDE5基因特异性siRNA改善糖尿病性勃起功能障碍大鼠勃起功能的研究
目的 探讨人鼠PDEs基因siRNA对糖尿病性勃起功能障碍(DM ED)大鼠PDE,基因表达的抑制作用及其对DMED大鼠勃起功能的影响.方法 构建可同时表达2条针对大鼠PDEs基因的shRNA重组腺病毒;50只雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照.其余建立DM ED人鼠模型,随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,分别将重组腺病毒rAd-rPDEs-shRNA、腺病毒rAd-mock及生理盐水注射于阴茎海绵体.注射后第7天,电刺激盆神经测定各组大鼠阴茎海绵体内压(ICP)及平均周围动脉压(MAP),然后取海绵体组织通过RT-PCR和Western blot分别检测PDE5基因mRNA及蛋白的表达.结果 ICP/MAP实验组和正常对照组显著高于阴性对照组和窄白对照组(P＜0.05),实验组和正常对照组间无显著性差异(P＞0.05);RT-PCR和Western blot 分析,实验组大鼠PDE5基因mRNA和蛋白表达均显著低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 PDE5基因shRNA重组腺病毒转染可以改善DMED大鼠的勃起功能,为DMED治疗方法的探索提供了新的思路.
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PDE5基因多态性对伐地那非治疗男性勃起功能障碍疗效的影响
目的 伐地那非是临床治疗男性勃起功能障碍(ED)的一线药物,但疗效在不同人群中差异较大.本研究旨在探讨ED患者PDE5基因第2外显子Val 93 Ala基因多态性对伐地那非疗效的影响.方法 对本院270例ED患者给予伐地那非口服1周,同时采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对所有患者进行PDE5基因分型,观察不同基因型治疗前后性功能指标变化、疗效及不良反应.结果 270例ED患者中AA型为201例,AG型为44例,GG型为25例,基因型分布符合H-W平衡,具有群体代表性.伐地那非治疗后性生活持续时间、性生活满意度和IIEF 评分各项指标在3种基因型之间差异有统计学意义,G等位基因携带患者有效率显著低于A等位基因携带患者.结论 伐地那非治疗ED的疗效和个体遗传因素有关,PDE5基因G等位基因携带者疗效较差,应引起临床重视.
