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PLB小干扰RNA对感染性休克大鼠左心功能的作用
目的 探讨磷酸受纳蛋白(PLB)小干扰RNA对感染性休克大鼠左心功能的影响.方法 雌性Wistar大鼠75只,随机分为假手术组、感染性休克组、盐水组、PLB siRNA组和对照组,每组15只,通过腺病毒表达载体构建重组RNA干扰腺病毒表达载体(pAdeno-X-siPLB),并导入大鼠心肌,6周后,测量左室舒张末期压(LVEDP),左室收缩压(LVSP),左室内压大上升和下降速率(±dP/dtmax),RT-PCR和Western-blotting分别检测PLB表达水平.结果 感染性休克组、盐水组PLB mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);PLB siRNA组PLB mRNA表达水平显著低于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组PLB mRNA表达水平比较差异无统计学意义;感染性休克组、盐水组和PLB siRNA组SR Ca2+-ATPase活力显著低于对照组(P<0.05);PLB siRNA组PLB SR Ca2+-ATPase活力显著高于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组SR Ca2+-ATPase活力比较差异无统计学意义;感染性休克组、盐水组、PLB siRNA组LVSP、+dP/dtmax、-dP/dtmax显著低于对照组(P<0.05),LVEDP显著高于对照组(P<0.05);PLB siRNA组LVSP、+dP/dtmax、-dP/dtmax显著高于感染性休克组(P<0.05),LVEDP显著低于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组LVSP、LVEDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax比较差异无统计学意义.结论 通过构建PLB小干扰RNA,心肌注射后对PLB表达有一定的沉默作用,从而提高SR Ca2+-ATPase活性,提高心脏储备,改善心功能.
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低氧习服对大鼠心肌肌浆网酶活性和钙摄取能力的影响
目的研究低氧习服对大鼠心肌功能的影响.方法 18只雄性Wistar大鼠,随机分为常氧对照组、急性低氧组和间断低氧习服组3组,每组n=6.经间断低氧习服(先后模拟海拔3 000 m和5 000 m低氧各14 d,每天4 h,后8 000 m低氧4 h)和急性低氧(模拟海拔8 000 m低氧4 h)的大鼠,断头处死,迅速取出心脏,分离心肌浆网SR,用水解磷酸根法测定ATP酶活性,用γ-32Pi参入法测定PLB的磷酸化,用微孔滤膜过滤技术测定ATP依赖性心肌SR 45Ca2+摄取功能.结果 1)低氧对大鼠心肌SR Na+,K+-ATPase的活性无明显影响;2)急性低氧大鼠心肌SR Ca2+,Mg2+-ATPase活性较正常大鼠显著降低(P<0.01),而低氧习服大鼠心肌SR Ca2+,Mg2+-ATPase活性则较未习服者明显为高(P<0.01),接近正常水平;3)急性低氧大鼠心肌SR PLB的磷酸化显著减弱,而低氧习服大鼠PLB的磷酸化则明显提高,表明低氧习服可减轻对钙泵的抑制;4)急性低氧可显著抑制心肌SR对45Ca2+的摄取,而低氧习服时,SR摄取45Ca2+的能力显著增强,大摄取量显著增高.结论低氧习服可以明显提高心肌SR Ca2+,Mg2+-ATPase及钙泵的活性,从而提高心肌收缩和舒张功能.
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磷酸受纳蛋白反义RNA转染减轻心肌梗死后心室重塑和心力衰竭的发生
目的 探讨磷酸受纳蛋白反义RNA真核表达质粒转染心肌对心肌梗死后心脏功能及病理性心室重塑的影响.方法 Wistar大鼠70只,分为生理盐水组(28只),假手术组(13只),冠状动脉结扎制备大鼠心肌梗死后心力衰竭模型,直接心肌注射转染磷酸受纳蛋白反义RNA真核表达质粒(PcDNA4-asPLB组,29只),评价假手术组、生理盐水组及PcDNA4-asPLB组心脏舒缩功能及血流动力学改变.检测各组大鼠心肌磷酸受纳蛋白(PLB)、肌浆网Ca2+ATP酶(SERCA2a)蛋白表达水平及心房尿钠肽(ANP)及脑型尿钠肽(BNP)mRNA表达;病理检查分析各组大鼠心肌梗死面积、前壁变薄比、心肌细胞横径及纤维沉积状况.结果 超声心动图及血流动力学检测发现心肌梗死后PcDNA4-asPLB组大鼠心脏舒缩功能及血流动力学明显优于生理盐水组,尤以心肌梗死后第4周更为明显[左室射血分数(39.4±7.8)%比(30.9±7.4)%,P<0.05;压力变化的大值(1545±127)mm Hg·s-1比(1172±91)mm Hg·s-1,P<0.05].PcDNA4-asPLB组PLB表达明显受抑,仅为生理盐水组的50%(PLB/β-肌动蛋白比值,0.28±0.07比0.57±0.11,P<0.05),SERCA2a表达较生理盐水组增强[(1.47±0.21)μmol·min-1·g-1蛋白比(0.34±0.13)μmol·min-1·g-1蛋白,P<0.05].生理盐水组前壁变薄比、心肌细胞横径、纤维沉积及胚胎基因表达等心室重塑改变较PcDNA4-asPLB组明显.结论 PcDNA4-asPLB转染抑制PLB表达,减轻和逆转心肌梗死后心室重塑,延缓心肌梗死后心力衰竭的发生.
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肌浆网钙泵和磷酸受纳蛋白在舒张性心衰患者中的表达
目的研究肌浆网钙泵和磷酸受纳蛋白在舒张性心衰(DHF)患者心肌细胞内Cla2+调节中的作用.方法采用:电极直流等离子体原子发射光电直读光谱法测定心肌细胞内Ca2+含量,采用免疫组化和western blot技术测定DHF患者和正常对照组肌浆网钙泵(Ca2+ATPase)和磷酸受纳蛋白表达的变化.结果DHF患者心肌细胞内Ca2+含量明显高于与正常组(1 163.88士568.67ug/ml,247.75±146 86ug/ml,P<0.01);Ca2+-ATPase蛋白的相对含量明显低于对照组(0.76±0.11,1.01士0.03,P<0.05);磷酸受纳蛋白的相对含量无显著性差异(0.98±0.04,1.00士0.02).结论SRCa2+-ATPase表达减低是导致心肌细胞内Ca 2+超负荷和DHF发生的重要因素.
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运动对1型糖尿病大鼠心肌肌浆网钙调控蛋白表达的影响
目的 观察运动对1型糖尿病大鼠心肌肌浆网钙调控蛋白表达的影响,并探讨其机制.方法 选用健康Spragne-Dawley大鼠,随机分为正常对照组、运动对照组、糖尿病组和糖尿病+运动组,每组10只.用腹腔注射链脲佐菌素(55 mg/ks)法复制糖尿病模型,糖尿病+运动组大鼠在糖尿病模型建成后第4天开始跑台运动,于运动第4周末心脏采血,制备血清.采用放射免疫法测定血清胰岛素水平,采用RT-PCR法检测肌浆网Ca结果-ATP酶(SERCA)、磷酸受纳蛋白(PLB)和Ryanodine受体-2(RyR2)mRNA的表达,采用Western-blotting法检测SERCA2、PLB蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,糖尿病组血糖、糖化血清蛋白及低密度脂蛋白水平升高,胰岛素和高密度脂蛋白水平降低,心肌SERCA2、PLB、RyR2 mRNA和SERCA2、PLB蛋白表达差异无统计学意义;糖尿病+运动组血糖水平升高,胰岛素水平降低,心肌SERCA2、PLB和RyR2的mRNA表达水平提高,SERCA2、PLB蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P<0.01).与糖尿病组相比,糖尿病+运动组大鼠糖化血清蛋白及低密度脂蛋白水平显著降低(P<0.01),SERCA2、PLB、RyR2 mRNA及SERCA2、PLB蛋白表达显著升高(P<0.01).结论 运动对1型糖尿病大鼠心肌损伤有防治作用,其机制可能与运动上调SERCA2、PLB和RyR2的表达有关.
