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肺炎克雷伯菌新生儿医院感染分离株耐药性及β-内酰胺酶CTX-M基因检测
目的了解新生儿医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株的耐药性及β-内酰胺酶CTX-M耐药基因的存在状况. 方法对表型确认证实产ESBLs肺炎克雷伯菌进行药敏试验并用PCR扩增检测CTX-M基因. 结果 14株产ESBLs肺炎克雷伯菌药敏结果一致,耐三代头孢和耐酶抑制剂,均检出CTX-M基因. 结论随着CTX-M酶分布日渐广泛,有必要对其进行深入研究,了解不同的产CTX-M酶菌株耐药水平之差异.
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产ESBLs肺炎克雷伯菌CTX-M基因检测及药敏分析
目的:了解本地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株中,CTX-M型菌株与非CTX-M型菌株的耐药特点,为临床用药提供数据.方法:收集ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌临床分离株64株,应用聚合酶链反应(PCR)扩增产ESBLs株质粒的CTX-M基因.采用NCCLS推荐的琼脂稀释法测定11种抗生素对所有产酶株的低抑菌浓度(MIC),并对结果进行分析.结果: 产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南的敏感率为100%,对哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、头孢西丁和阿米卡星敏感率分别为71.8%、70.3%、65.6%和62.5%,氨苄西林/舒巴坦几乎没有抗菌活性(敏感率为1.6%),产CTX-M株与非CTX-M型产酶株对上述药物的敏感性无显著差异.但对头孢噻肟和头孢他啶却表现出不同的药敏特性.CTX-M阳性株对头孢噻肟的敏感性远低于CTX-M阴性株(7.1% 比 68.2%).但对于头孢他啶,CTX-M阳性株的敏感性却明显高于CTX-M阴性株(54.2% 比 27.3%).结论:(1)亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、头孢西丁和阿米卡星对产ESBLs肺炎克雷伯菌有较好的抗菌活性,氨苄西林/舒巴坦对其几乎没有抗菌作用.(2)用于检测ESBLs的底物应包括头孢噻肟,以防漏检CTX-M型ESBLs.
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产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌药敏试验结果分析
目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌分离株的耐药特点,为临床用药提供数据.方法收集我院临床分离的确证为产ESBLs的大肠埃希菌151株,应用聚合酶链反应(PCR)检测产ESBLs株质粒的CTX-M基因.采用NCCLS推荐的琼脂稀释法测定11种抗生素对所有产酶株的低抑菌浓度(MIC),并对结果进行分析.结果PCR结果显示,151株产ESBLs大肠埃希菌中CTX-M阳性为139株.在139株产CTX-M大肠埃希菌中,亚胺培南的抗菌活性强,敏感率为100%,MIC90为0.25μg/ml;其次为阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦,敏感率分别为92.1%和90.6%;头孢西丁对其也有一定的抗菌活性,敏感率为64.7%;环丙沙星和氨苄西林/舒巴坦抗菌活性非常低,敏感率分别为20.9%和0.结论本地区临床分离的大肠埃希菌所产的ESBLs大多为CTX-M型,亚胺培南、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦对产CTX-M型ESBL s菌有很好的抗菌活性,氨苄西林/舒巴坦对其几乎没有抗菌作用.
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CTX-M基因在福建省多重耐药志贺菌中分布研究
目的 了解福建省多重耐药志贺菌CTX-M基因及基因家族中各耐药基因组的分布情况；结合耐药谱分析该类基因和多重耐药的关系.方法 煮沸裂解法提取2005年-2010年福建省细菌性痢疾监测分离到的103株志贺菌的DNA,PCR检测CTX-M基因以及亚群基因组(CTX-M-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ).结果 CTX-M及亚群基因阳性率分别为33.98％、6.8％、20.39％、0％、20.39％、0％;福氏和宋内氏志贺菌CTX-M及亚群基因阳性率差别无统计学意义.AMP、AMC、CFT、CEF、CTX及CIP耐药组与非耐药组CTX-M基因分布存在差异,P＜0.05.菌株同时携带CTX-M-Ⅱ和Ⅳ基因组为优势基因模式.结论 CTX-M基因与志贺菌β-内酰胺类抗生素耐药存在关联;福建省多重耐药志贺菌CTX-M的亚群以CTX-M-Ⅱ和Ⅳ常见;且同时携带这两种基因组,可能是菌株对β-内酰胺类抗生素耐药的优势基因模式.
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ESBLs肠道致病菌中CTX-M基因的鉴定与分型
目的 了解临床分离肠道致病菌中产ESBLs菌株的发生率、流行特征及产CTX-M型耐药表型和基因型.方法 对临床分离到的161株肠道致病菌进行ESBLs表型确证试验；采用聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M基因,对PCR产物测序并确定基因亚型；采用K-B琼脂扩散法对23种抗菌药物的耐药性进行检测.结果 161株肠道致病菌中有85株(52.8％)ESBLs表型检测阳性.PCR扩增结果表明,共有24株(28.2％)携带CTX-M型基因,其中10株(41.7％)检出CTX-M-1组基因,14株(58.3％)检出CTX-M-9组基因.基因测序确定存在CTX-M-3、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-24、CTX-M-27等多种亚型,以CTX-M-14为主.药敏结果显示,不同基因型均对青霉素类,第一、二、三代头孢菌素类抗生素有较为明显的抗药性.结论 乌鲁木齐地区肠道致病菌产ESBLs现象较为普遍,对氨苄西林、头孢唑林、头孢噻吩、和头孢呋辛高度耐药.细菌基因型以CTX-M-14亚型为主,同时存在多种亚型.首次在新疆地区检出CTX-M-3、CTX-M-15、CTX-M-24、CTX-M-27基因亚型.
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安徽省产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药性和基因型研究
目的 了解安徽地区产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肺炎克雷伯菌检出率,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法纸片法进行表型鉴定;PCR检测产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株;分析基因型;琼脂稀释法进行药物敏感试验.结果 52株肺炎克雷伯菌经通用引物PCR检测证实产CTX-M酶,占所有分离菌株的23.4%(52/222),占产ESBLs菌株的49.5%(52/105);经序列分析显示:15株CTX-M-1组阳性结果有12株表达CTX-M-22,2株表达CTX-M-15,1株表达CTX-M-3;37株CTX-M-9组阳性结果有35株表达CTX-M-14,2株表达CTX-M-24;CTX-M-2组和CTX-M-8组未检测出;其中有2株新基因被检出(序列号分别为EU136031和EU202673);药敏结果显示临床野生菌株对多种β-内酰胺类耐药,对哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶相对较敏感.结论安徽地区CTX-M酶以CTX-M-14型和CTX-M-22型为主,同时存在变异型;药敏结果显示产酶菌株对头孢噻肟和头孢曲松、氨苄西林高度耐药.
关键词： 超广谱β-内酰胺酶类 肺炎克雷伯菌 CTX-M基因 耐药性 -
细菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因定点突变对酶活性的影响研究
目的 构建CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因突变体,比较突变前、后酶活性的变化,进一步阐明酶的分子结构特征和生化特性.方法 利用重叠延伸PCR定点诱变技术将CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因Ser240(丝氨酸)AGC定点突变为Gly240(甘氨酸)GGC,分别构建CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体,重组载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌JM109,比较突变前、后酶活性的改变.结果 酶切鉴定和DNA测序鉴定表明CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体构建成功,转化大肠埃希菌JM109后,发现含野生型CTX-M基因的重组菌其酶活性与来源菌株相近,而含突变型CTX-M基因的重组菌未检测到酶活性.结论 Ser240对于维持CTX-M型超广谱β-内酰胺酶活性具有重要作用.
