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HLA-B27基因荧光定量方法的确立与多种方法比较研究
目的：在原研究的基础上，重新合成T aqman探针，建立一种新的强直性脊柱炎基因 H L A‐B27荧光定量PCR（FQ‐PCR）方法，为临床治疗提供参考依据。方法2012年1－11月收集的医院强直性脊柱炎282例，优化各种PCR条件，并与多种方法比较，检测强直性脊柱炎及相关的各类疾病，同期选择100名健康体检人群作为阴性对照，采用SYBR法和Taqman特异性探针荧光定量检测法。结果 FQ‐PCR生成动力学有关的 PCR扩增曲线由荧光信号强度周期数，HLA‐B27的标准曲线是循环阈值之间线性关系（ct）和起始拷贝数；高度相关（0．999）揭示FQ‐PCR的可靠性；确立的Taqman法有良好的线性和精度并与流式细胞和SYBR法比较，具有良好的相关性（P＜0．05）。结论新确立的荧光定量PCR（Taqman）比其他方法更可靠准确，并有很好的应用价值。
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SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR快速检测HLA-B27方法学的建立
建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法快速检测HLA-B27,拟确定该法的阳性参考区间.强直性脊柱炎患者42例、类风湿性关节炎患者53例及健康体检者80例分别应用PCR-SSP法和SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测HLA-B27,并对两种方法进行比较.两种方法结果符合率为100％,初步拟定HLA-B27的阳性参考范围是:GAPDH的Ct在23.85～25.59,以99％百分位法建立HLA-B27阳性参考范围为CtB27＜21.54.SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法快捷、灵敏,适合于临床开展.
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采用 PCR-SSP法检测HLA-B27基因
目的:建立顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法检测HLA-B27基因并与血清学方法比较.方法:设计合成B27特异引物3个和内源性阳性对照2个,建立PCR-SSP方法,用于B27基因分型.血清学分型为一步法单克隆抗体方法.临床样本100份,来源于可疑强直性脊柱炎患者.快速酚氯仿法提取模板DNA.结果:100例临床样本PCR-SSP行B27基因分型均获成功.总耗时4 h.其中B27阴性58例,阳性42例,5例临床诊断为强直性脊柱炎,占11.9%.30份样本同时行血清学分型,20份B27阴性,5份阳性,5份可疑阳性.其中20份阴性中3例为阳性,5份可疑阳性中2例为阴性.结论:PCR-SSP行B27基因分型,分辨度高、特异性强,快捷、准确,适合于临床应用.
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强直性脊柱炎的遗传学研究进展
强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种主要侵犯中轴骨关节系统的慢性炎症性疾病,具有高度遗传倾向.迄今为止,AS的发病机制仍不明确.目前的报道大多集中在AS发病的遗传因素和环境因素两个方面.既往的研究主要报道HLA-B27基因与AS的发生强关联,但近年来大量的研究提示除HLA-B27基因外,基因组中可能还存在其他的MHC类和非MHC类基因与AS相关.现着重综述AS发病机制的遗传学因素的研究进展.
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强直性脊柱炎发病机制的遗传学研究
强直性脊椎炎是由遗传因素主导的疾病,HLA-B27基因与之有很强的关联,很多其他的基因也被证实对其发病有或多或少的影响.本文仅就强直性脊椎炎所涉及的相关基因及其可能的发病机制作一综述.
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强直性脊柱炎发病的遗传因素研究进展
强直性脊柱炎是以遗传因素占主导地位的疾病,由B27和其他相关基因参与.本文就其在遗传因素上的病因综述了HLA-B27与强直性脊柱炎的关联、家系研究、动物模型、全基因组扫描和其他相关基因方面的研究进展.
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HLA-B27亚型与强直性脊柱炎相关性分析
目的 了解苏州地区汉族人群的正常人和强直性脊柱炎(AS)患者的HLA-B27亚型基因分布的特点,分析HLA-B27亚型与AS的相关性.方法 对正常人HLA-B27基因阳性组(简称正常组)50人、AS患者HLA-B27基因阳性组(简称AS组)160例采用特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)进行了HLA-B27亚型基因检测.结果 在正常组和AS组中,共检测出7种亚型,AS组和正常组都以HLA-B*2704亚型和HLA-B*2705亚型为主,两亚型合占分别为96.2%和92%.HLA-B*2704亚型阳性率AS组明显高于正常组,HLA-B*2705亚型阳性率正常组明显高于AS组(均P＜0.01).HLA-B*2707亚型和HLA-B*2711亚型在两组都检测到,但无显著性差异(P＞0.05).HLA-B*2702亚型只在AS组测到1例,而HLA-B*2706亚型和HLA-B*2703亚型只在正常组分别测到1例.结论 HLA-B*2704和HLA-B*2705是苏州地区汉族人群AS的易感基因,而HLA-B*2704与AS呈强相关.
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HLA-B27基因检测对强直性脊柱炎诊断的评价
目的评价聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法检测HLA-B27基因对强直性脊柱炎(AS)的临床诊断价值.方法对87例临床疑似AS患者按MNY标准诊断分为病例组(AS组)和对照组(非AS组),并以PCR-SSP法检测患者血样HLA-B27基因,盲法比较二者结果.结果病例组和对照组HLA-B27阳性率分别为92.86%和11.11%,差异有统计学意义(P＜0.05).HLA-B27基因检测对AS诊断的敏感度(Sen)为92.8%、特异度(Spe)为88.9%、准确度(Acc)为90.8%、阳性预测值(+PV)为88.6%、阴性预测值(-PV)为93.0%、阳性似然比(+LR)为8.4、阴性似然比(-LR)为0.08,比值比(OR)为104.0.结论该法检测HLA-B27基因对AS诊断有较高敏感度和特异度,是一种准确、有效的实验诊断方法.
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鲁西南汉族HLA-B27基因亚型分布与强直性脊柱炎的关联研究
目的:调查鲁西南汉族人群中正常人和强直性脊柱炎(AS)患者的HLA-B* 27基因亚型的频率分布状况,并分析HLA-B* 27亚型与AS的相关性.方法:对826名正常人(对照组)、76例AS患者(AS组)采用特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)进行HLA-B* 27基因及亚型检测.结果:在正常组和AS组中,共检出了11种HLA-B* 27亚型,2组均以B*2704和B*2705亚型为优势亚型,2亚型分别为38.8％和41.8％.2组间的B* 2704和B*2705亚型的构成比差异无统计学意义.结论:HLA-B* 2704和HLA-B* 2705是鲁西南地区汉族人群AS的易感基因,与鲁西南地区汉族人群AS的发病呈强相关.
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HLA-B27基因检测的临床应用
目的 探讨HLA-B27基因检测的临床应用效果.方法 对100例临床送检疑似强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)病例(观察组)及30例经体检合格的献血员(对照组),采用聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)进行HLA-B27基因检测,并与流式细胞术检测结果比较.结果 在100例疑似AS病例中,应用PCR-SSP方法检出HLA-B27基因69例,未检出HLA-B27基因31例,30例献血员均未检出HLA-B27基因;用流式细胞术检测,得出与PCR-SSP法完全相同的结果.结论 HLA-B27检测PCR-SSP法和流式细胞术各有特点:PCR-SSP法具有结果准确、成本低、标本可长期保存,便于进行实验室间质量评价等特点;流式细胞术具有简便快捷、自动化程度高、结果判断客观性强等特点.
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益赛普对携带HLA-B27基因的未分化脊柱关节病患者的疗效
目的 评价肿瘤坏死因子抑制剂益赛普治疗携带HLA-B27基因的未分化脊柱关节病(uSPA)患者的临床疗效和安全性.方法 将56例HLA-B27阳性uSpA患者分成两组,试验组36例应用生物制剂益赛普25m∥次,每周2次皮下注射,联合传统治疗方案慢作用改善病情药物+非甾类抗炎药(甲氨蝶呤10mg凋+美洛昔康7.5mg/d)治疗;对照组20例使用传统治疗方案,同等剂量甲氨蝶呤+美洛昔康治疗,疗程12周,记录各组治疗前后患者的症状、体征、疾病功能指数BASFM)、红细胞沉降率(ESR)及C-反应蛋白(CRP)等实验室指标及不良反应.结果 试验组使用益赛普治疗1周,12周后患者的脊柱痛与夜间痛程度均明显改善,BASFAI、血沉、CRP均显著下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).试验组治疗12周后达到疗效20％、50％、70％改善的患者分别为34例(94.4％)、32例(88.9％)、29例(80.6％),均优于对照组(P＜0.05).不良反应主要为注射部位反应.结论 益赛普治疗HLA-B27阳性uSpA患者临床效果显著,安全性和耐受性好.
