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PCR-SSP法在强直性脊椎炎患者中HLA-B27的诊断作用
HLA-B27是人类白细胞抗原B位点上的一个重要的等位基因,与脊椎关节系统疾病如强直性脊柱炎(AS)、反应性关节炎(ReA)、Reiter 氏综合征(RS)等许多严重危害人类健康的疾病密切相关.HLA-B27的检测有血清学检测和PCR技术检测两种,我们对疑为强直性脊椎炎患者的HLA-B27进行了两种方法的检测,报告如下.
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HLA-A、B抗原分型与AIDP易感性
目的探讨AIDP易感性与HLA-A、B抗原分型的关联性.方法对31例AIDP患者和132例健康对照采用PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原的基因分型.结果 HLA-A33抗原频率在AIDP组升高(P<0.05),相对危险率RR＝6.125.结论 HLA-A33 抗原与AIDP易感性相关联.
关键词： HLA分型 急性炎性脱髓鞘性多发性神经病 易感性 PCR-SSP法 -
PCR-SSP法与MCLT法检测福建地区强直性脊柱炎疑似患者HLA-B27的比较
目的 通过对福建地区877例强直性脊柱炎(AS)疑似患者HLA-B27的检测,比较PCR-SSP法与MCLT法两种检测方法,初步了解本地区AS疑似患者与B27抗原的相关性.方法 采用PCR-SSP法、MCLT法检测AS疑似患者HLA-B27表达.结果 采用PCR-SSP法检测的379例样本,B27阳性检出率39.84%,采用MCLT法检测的498例样本,B27阳性检出率27.11%;两种方法共同检测样本119例,其中PCR-SSP法检测阳性46例、MCLT法检测阳性39例.877例AS疑似患者B27阳性者男女比例为2.8:1;其中16～30岁年龄段男性AS疑似患者阳性率高.结论 PCR-SSP法较MCLT法检测HLA-B27准确性高、特异性高、稳定性好,在一定程度上避免了漏检,克服了MCLT法的一些弊端,具有较好的临床适用性.本室检测的877例样本反映出福建地区AS疑似患者HLA-B27阳性男性明显多于女性,且青壮年男性HLA-B27阳性率高.
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53例羊水细胞ABO血型基因鉴定
目的 通过PCR-SSP基因技术检测胎儿羊水细胞ABO血型基因型,产前诊断胎儿ABO血型.方法 选取了53例孕16周-25周的孕妇,抽取羊水细胞并进行细胞培养2d～5d,然后分离羊水细胞,提取羊水细胞DNA,运用PCR-SSP技术分析其ABO血型基因型;选取出生后的婴儿,采集脐带血或外周血,并用玻片法和微柱凝胶ABO血型卡检测其ABO血型.结果 53例羊水标本中有48例羊水标本通过PCR-SSP方法检测出了ABO血型的基因型;53例孕妇中有24例胎儿的脐带血或外周血经过了血清学和微柱凝胶ABO血型检测,有3例标本未能检测出结果;21例胎儿脐带血或外周血的ABO血型与经基因鉴定的胎儿羊水细胞ABO血型完全一致.结论 PCR-SSP技术可以准确地检测胎儿羊水细胞的ABO血型.
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PCR-SSP法检测吉林省汉族人群血小板抗原1～6系统研究
目的:应用PCR-SSP法对吉林省汉族人群入血小板同种抗原系统(HPA)1～6进行基因及其多态性分布特征研究.方法:用DNA试剂盒提取外周血标本中DNA,通过特异性引物(PCR-SSP)扩增HPA等位基因.检测200名HPA1～6抗原系统共12个抗原的基因分型.结果:200名无偿献血并无血缘关系的吉林省汉族人群HPA基因频率为:HPA-1a 0.990 0、1b0.0100;2a0.9300、2b 0.0700;3a 0.557 5、3b0.4425;4a1.0000、4b 0.0000;5a 0.9900、5b 0.0100；6a 0.9875、6b 0.0125.结论:吉林地区血小板志愿捐献者HPA1～6抗原系统的基因频率符合Hardy-Weinberg遗传定律,与其他地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,由此建立起了吉林地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库.
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HLA-B27基因检测的临床应用
目的 探讨HLA-B27基因检测的临床应用效果.方法 对100例临床送检疑似强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)病例(观察组)及30例经体检合格的献血员(对照组),采用聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)进行HLA-B27基因检测,并与流式细胞术检测结果比较.结果 在100例疑似AS病例中,应用PCR-SSP方法检出HLA-B27基因69例,未检出HLA-B27基因31例,30例献血员均未检出HLA-B27基因;用流式细胞术检测,得出与PCR-SSP法完全相同的结果.结论 HLA-B27检测PCR-SSP法和流式细胞术各有特点:PCR-SSP法具有结果准确、成本低、标本可长期保存,便于进行实验室间质量评价等特点;流式细胞术具有简便快捷、自动化程度高、结果判断客观性强等特点.
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一例B303亚型的鉴定及家系遗传分析
目的 对1例ABO正反定型不符的标本进行血型血清学鉴定,并探讨其ABO基因的分子机制.方法 分析该家系2代共5例标本,ABO表型采用血型血清学试验,通过对1例B亚型先证者和4例家系成员ABO基因第6、7外显子和第3内含子的测序分析来确定其基因型.结果 5例家系成员中有4例亚型:3例为AB3亚型,1例为B3亚型.基因型分型分别为A102/B303和O02/B303.DNA序列分析显示,与B101相比,B303存在第3内含子+5G＞A突变.结论 第3内含子的+5G＞A位点的点突变是B303的特异性突变.
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PCR-SSP技术对羊水细胞ABO血型的基因鉴定
目的 通过PCR-SSP基因技术检测胎儿羊水细胞ABO血型基因型,产前诊断胎儿ABO血型.方法 选取了6名孕16 W以上的孕妇,抽取羊水细胞并进行分离,提取羊水细胞DNA,运用PCR-SSP技术分析其ABO血型基因型,并通过出生后的脐带血的血型鉴定进行确认.结果 6例羊水标本均通过PCR-SSP方法检测出了ABO血型的基因型;该6名胎儿的脐带血的ABO血型与羊水细胞的血型一致.结论 PCR-SSP技术可以准确地检测胎儿羊水细胞的ABO血型.
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广东人Kell血型系统基因分型
Kell血型是使用抗人球蛋白试验方法(又称为Coombs试验)检出的第1个血型,相应抗体是在一位姓Kell的产妇血清中发现的,故被称为抗-Kell[1],后来又检出了抗-K的对偶抗体抗-k.K和k抗原均表现为显性遗传,因此具有KK、Kk、kk、和K-k-4种表型.由于Kell抗原的抗原性较强,所以在输血中有较重要的意义.到目前为止,我国已有关于Kell血型系统的血清学分型研究报道,但尚未见采用基因分型技术分型报告.笔者运用PCR-SSP法分析广东人Kell血型的多态性及其分布.
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利用PCR-SSP法研究肺腺癌细胞系A549、Calu-6的HLA-ABDR等位基因
背景和目的已有的研究表明人类白细胞抗原(HLA)在抗原呈递及T细胞识别抗原的过程中起关键作用,此外还与肿瘤细胞的免疫杀伤及免疫逃避有着密切的关系.本研究探讨了人肺腺癌细胞系A549、Calu-6中HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因的存在状况.方法分离A549、Calu-6细胞DNA,分别行PCR-SSP法扩增、电泳后紫外透射扫描,根据反应格局表对HLA-A、HLA-B、HLA-DR进行判定.结果A549与Calu-6细胞中HLA-A、HLA-B基因较杂合子均有缺失,而HLA-DR基因无缺失.A549细胞HLA-ABDR的基因分型为HLA-A30、HLA-B44、HLA-DR7/HLA-DR53.Calu-6细胞HLA-ABDR的基因分型为HLA-A01、HLA-B08、HLA-DR17/HLA-DR52.结论肺腺癌中存在HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ基因.HLA-Ⅰ基因可能在肿瘤细胞传代过程中发生选择性丢失,而HLA-DR基因完整保留.检测肿瘤HLA对了解其免疫学行为及建立肿瘤特异性杀伤淋巴细胞(CTL)模型具有重要意义.
