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北虫草水提物对肺腺癌细胞A549的影响
本文采用MTT法进行北虫草水提取物对肺腺癌细胞A549体外抑制的研究。结果表明：北虫草水提取物可抑制肺腺癌细胞A549的生长，细胞形态发生明显变化。随着北虫草水提物浓度的增加，抑制率显著增大，呈明显的剂量依赖。当北虫草水提物浓度为3mg/mL时，抑制率大为74.14%±4.49（P<0.05），为北虫草临床治疗肺癌提供理论依据。.
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肺炎链球菌通过Wnt信号通路介导肺腺癌细胞A549损伤的机制研究
目的 研究肺炎链球菌刺激对肺腺癌细胞A549损伤的影响及作用机制.方法 体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分为对照组和肺炎链球菌R6刺激组.R6刺激组将肺炎链球菌按照1×108个/ml的量加入A549细胞中进行刺激,对照组加入等体积的曲古抑素A(TSA)处理作为对照.分别处理8 h、16 h、24 h、32 h,MTT检测处理各时间点A549细胞存活情况;流式细胞仪检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测R6刺激24 h后炎症因子白介素6(IL-6)、IL-10含量变化;Western-blot检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡相关蛋白及Wnt通路蛋白表达.结果 R6刺激显著抑制A549细胞存活,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05),R6刺激24 h对A549细胞存活抑制效果明显.R6刺激24 h后,A549细胞凋亡率增高,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05).R6刺激24 h后促炎因子IL-6含量显著增加,抗炎因子IL-10含量明显降低,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05).Western-blot结果显示R6刺激后,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,抑凋亡因子Bcl-2表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05),Wnt通路蛋白 β-catenin、p-GSK-3β 表达明显升高,p-β-cate-nin、GSK-3β表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05).结论 肺炎链球菌刺激会对肺腺癌细胞A549损伤造成损伤,这一过程与Wnt信号通路的激活有关.
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黄芪多糖逆转吉非替尼获得性耐药肺腺癌细胞的作用研究
目的 探究黄芪多糖逆转吉非替尼获得性耐药肺腺癌细胞的作用.方法 采用CCK8实验观察吉非替尼与黄芪多糖单用及联用对获得性耐药肺腺癌细胞PC9/EMT增殖活性的影响;qRT-PCR、Western blotting检测发生上皮间质转化(EMT)后E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白的变化.结果 TGF-β1(10 ng/ml,120 h)作用于PC9细胞后,形态呈梭形改变,细胞连接疏松,并且表现出了EMT特征:E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平降低,同时Vim-entin的mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05).吉非替尼的IC50值明显升高,说明吉非替尼对PC9/EMT细胞抑制能力明显减弱,证实其产生耐药性(P<0.01).黄芪多糖联合吉非替尼组对PC9/EMT细胞增殖抑制效应优于吉非替尼组,协同增效作用明显(P<0.05);两药联用明显逆转PC9细胞EMT的发生,间质细胞相关蛋白Vimentin表达水平降低(P<0.05),上皮细胞相关蛋白E-cadherin表达水平升高(P<0.05).结论 黄芪多糖可显著抑制吉非替尼获得性耐药肺腺癌PC9细胞的增殖,抑制其EMT转化.
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TNP-470对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的探讨TNP-470对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法以不同浓度的TNP-470作用于培养的肺腺癌AGZY-82A细胞株,以免疫组化S-P法检测肺腺癌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、bcl-2、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF 受体Flk-1的表达.结果随着TNP-470浓度的增加,肺腺癌细胞VEGF、Flk-1、PCNA的表达减少,p53、bcl-2的表达逐渐增加;当TNP-470为107 μg/L时,细胞增殖几乎停止.随着TNP-470(104 μg/L)作用时间的延长,肺腺癌细胞VEGF、Flk-1、PCNA的表达逐渐减少,而p53、bcl-2的表达逐渐增加.结论 TNP-470通过使肺腺癌细胞自分泌VEGF减少,Flk表达降低,从而抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡.
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泰索帝合并温热对肺腺癌细胞的杀伤效应
目的 研究泰索帝合并温热对SPC-A-1肺腺癌细胞的杀伤效应.方法 不同浓度(0.05 μg/ml～10μg/ml)泰索帝合并温热(39～42℃)作用后,应用MTT法测定其对细胞的杀伤效应,用流式细胞仪和Feulgen染色法检测5μg/ml泰索帝合并41℃对细胞周期影响,并用考马氏亮蓝法观察细胞骨架的形态变化.结果 40℃以上温热作用60min,可抑制SPC-A-1细胞生长,其效应随温度的升高逐渐增强,以42℃明显;24h后,各组抑制效应均较即时组更明显.泰索帝单独作用对肺癌细胞的杀伤效应在5μg/ml出现,停药后24h杀伤效应有所降低.低浓度泰索帝与39℃～42℃合并可见显著抑瘤协同效应,24h后协同效应仍存在.合并作用可使更多细胞阻滞于分裂期,细胞形态变圆,可出现骨架蛋白凝聚、细胞伸展不良,细胞分裂异常,可见较多微核、多核细胞.结论 泰索帝与温热合并有协同效应,可提高泰索帝对SPC-A-1肺腺癌细胞的杀伤效应,降低用药浓度,其机制可能与细胞骨架功能障碍及温热增加膜对药物通透性有关.
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吉非替尼与培美曲塞联合时序对EGFR不同类型人肺腺癌细胞作用观察
目的:通过体外研究吉非替尼不同时序联合培美曲塞对EGFR不同类型的人肺腺癌细胞A549和PC-9的生长抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨吉非替尼与培美曲塞的佳用药方式.方法:选取EGFR野生型A549和EGFR突变型PC-9人肺腺癌细胞为研究对象,分为对照组、培美曲塞单药72 h组、吉非替尼单药72 h组、培美曲塞24 h序贯吉非替尼48 h组、吉非替尼48 h序贯培美曲塞24 h组和吉非替尼同步联合培美曲塞72 h组.MTT法检测不同给药方式对细胞增殖抑制作用,Annexin Ⅴ FITC/PI双标记染色法和TUNEL法检测不同给药方式对细胞凋亡的影响.结果:吉非替尼联合培美曲塞、培美曲塞序贯吉非替尼均可以增强吉非替尼和培美曲塞两药对2种细胞的增殖抑制效应,而吉非替尼序贯培美曲塞的生长抑制率较2个单药降低.对PC-9细胞,各浓度下吉非替尼联合培美曲塞组的生长抑制率分别为40.61％、50.15％、62.96％、76.09％和86.09,高于培美曲塞序贯吉非替尼组,P＜0.001;对A549细胞,各浓度下培美曲塞序贯吉非替尼组的生长抑制率分别为43.89％、50.83％、65.71％、76.22%和85.91％,高于吉非替尼联合培美曲塞组,P＜0.001.Annexin Ⅴ FITC/PI双标记染色实验中,吉非替尼联合培美曲塞组对PC-9细胞的总凋亡率高,为70.2％,较其他各组差异有统计学意义,P＜0.001.培美曲塞序贯吉非替尼组对A549细胞的总凋亡率高,为97.4％,较其他各组差异有统计学意义,P＜0.001.TUNEL实验中,吉非替尼联合培美曲塞组对PC-9细胞的总凋亡率高,为82.99％,P＜0.001.培美曲塞序贯吉非替尼组对A549细胞的总凋亡率高,为82.69％,P＜0.001.结论:吉非替尼联合培美曲塞对EGFR突变型的PC-9细胞增殖抑制和诱导凋亡作用强,在EGFR野生型的A549细胞中,培美曲塞序贯吉非替尼的增殖抑制和诱导凋亡作用优,表明吉非替尼和培美曲塞两药的佳联用方式可能与EGFR基因突变状态有关.
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Ro60表达下调抑制肺腺癌A549细胞迁移和侵袭
目的：探究Ro60对肺腺癌A549细胞迁移和侵袭的影响。方法采用RNA干扰（ RNAi ）方法下调A549细胞中Ro60表达水平，检测其迁移和侵袭能力的改变，通过实时定量PCR和免疫印迹方法分析与肿瘤侵袭转移相关分子的表达变化。结果下调Ro60表达，A549细胞的迁移和侵袭能力均减弱，与肿瘤细胞迁移和侵袭相关的MMP9、c-Src等在mRNA水平明显降低，Src蛋白和MMP9酶原激活形式蛋白表达量下调。结论 Ro60表达下调抑制A549细胞的迁移和侵袭，并通过调控Src蛋白表达和MMP9酶原激活发挥作用。
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X线照射后A549肺癌细胞Ku80 mRNA及其蛋白表达的变化
Ku蛋白参与放射损伤修复,并与肿瘤的放射耐受密切相关[1-3].非小细胞肺癌尤其是肺腺癌细胞对射线不敏感.作为DNA损伤修复的主要成分之一,Ku蛋白在细胞受到照射后其含量是相对恒定,还是代偿性增加以对放射所致的DNA双链断裂进行修复,有关这个问题目前还鲜有报道.
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厄洛替尼和塞来昔布联合应用对人肺腺癌A549细胞放射增敏的研究
目的 探讨联合应用厄洛替尼和塞来昔布阻断表皮生长因子受体和环氧化酶-2受体对人肺腺癌A549细胞株的放射增敏效应及机制.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测厄洛替尼和塞来昔布的IC20作为后续实验浓度.体外培养克隆形成实验检测厄洛替尼和塞来昔布联合或不联合X射线对人肺腺癌A549细胞的作用,计算其存活分数,绘制细胞存活曲线.流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blot检测Akt和pAkt的表达.结果 厄洛替尼和塞来昔布的IG20分别为(5.15 ±0.14)和(40.32±1.26) μmol/L.照射+联合用药组的Dq、D0及SF2均明显低于单纯照射组、照射+塞来昔布组及照射+厄洛替尼组(t=6.62,P＜0.05)；照射+联合用药组、照射+厄洛替尼组和照射+塞来昔布组的SER为2.217、1.503和1.299.厄洛替尼和塞来昔布与射线联合作用后,使S期细胞比例减少,联合用药组作用更明显.药物作用前后及药物增敏照射后Akt在蛋白表达水平没有明显改变；塞来昔布和厄洛替尼均能抑制pAkt的表达,照射能够略提高pAkt蛋白的表达,与单纯照射组相比,塞来昔布或厄洛替尼联合照射组pAkt蛋白的表达减低,两药联用并联合照射组pAkt蛋白的表达低(t=4.89,P＜0.05).结论 厄洛替尼和塞来昔布各自均有放射增敏作用,两药联合应用可以进一步提高放射增敏效应.其机制涉及到使细胞周期中对射线不敏感的S期细胞减少到低,并进一步增强了射线诱导的凋亡.
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应用量子点纳米探针研究丹酚酸B与肿瘤细胞间的直接作用
目的 应用量子点纳米荧光探针示踪中药有效成分与细胞之间的直接作用,为该技术成为一种研究平台提供实验依据.方法 丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)经1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3(3-dimethylamino propyl)-carbodiimide,EDC]活化,以巯基乙胺(mercaptoethylamine,ME)为连接荆,与水溶性量子点(quantum dots,QDs)进行共价连接,将获得的QDs-SAB与肺腺癌细胞(SPCA-1)和肝癌细胞(7721)进行培育,通过QDs荧光直接观察SAB与细胞的结合情况,进而根据细胞形态观察、MTT和DNA电泳结果考察SAB是否对这些细胞有作用.结果 QDs可清晰地示踪SAB与SPCA-1和7721细胞之间结合情况,通过常规方法首次证实了SAB对这两种细胞有增殖抑制作用.结论 应用量子点纳米荧光探针直观发现中药有效成分与细胞之间的作用是可行的.
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金丝桃苷抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展
金丝桃苷具有镇痛、抗氧化、抗炎、避免微血栓形成、调节免疫功能、抑制肿瘤细胞生长等多种药理活性.研究表明,金丝桃苷不仅可通过阻滞细胞周期、Ca2相关的线粒体凋亡途径、胱天蛋白酶介导的细胞凋亡等明显抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,还能促进淋巴细胞的增殖分化、增强淋巴细胞的功能.该文就金丝桃苷抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展予以综述.
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托瑞米芬联合吉西他滨对肺癌细胞株A549 生长和凋亡的影响
目的 研究托瑞米芬(TOR)联合吉西他滨(GEM)对人肺癌株A549的影响,为肺癌的临床治疗提供新的方向.方法 用MTT比色法检测各组药物对细胞生长的抑制作用,用HE染色观察用药后细胞形态,用细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率.结果 托瑞米芬能直接抑制肺腺癌细胞A549的生长,低剂量托瑞米芬(5、10μmol/L)与吉西他滨联用后的抑制率较单用吉西他滨明显提高,并且随药物浓度增高而增高.联合用药组较单用化疗药物组凋亡率提高,而单用托瑞米芬对细胞的凋亡率与对照组比无明显变化.结论 托瑞米芬可抑制肺腺癌细胞A549的生长,但不能直接促进细胞凋亡;托瑞米芬与吉西他滨有明显的协同作用.
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腺病毒携带p53、GM-CSF、B7-1基因转染乳腺癌细胞诱导抗肿瘤免疫的研究
近年来肿瘤的基因免疫治疗研究已成为广大学者关注热点.其目的是通过对肿瘤细胞的基因修饰,提高其免疫原性、打破免疫逃避和免疫耐受,诱导免疫系统对肿瘤细胞的杀伤.本研究对腺病毒转染的p53、GM-CSF、B7-1三种外源基因是否可以提高乳腺癌细胞的免疫原性,以及乳腺癌基因免疫治疗的可行性,进行了并以肺腺癌细胞进行对比研究.
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周期性机械应力作用下肺腺癌A549细胞的增殖
本文应用Flexercell-4000柔性基底加载系统研究了不同波形及频率的机械拉伸对肺腺癌细胞增殖的影响.结果表明,在胶原-Ⅰ柔性基底膜应变为0～ 20％,频率30次/min、40次/min、50次/min及60次/min的拉伸刺激2h后,采用Image-pro图象分析软件测定,方波刺激下细胞的增殖率明显降低,且拉伸频率越高时间越长,抑制作用越强；心形波、正弦波及三角波刺激下细胞增殖率与对照组比较无明显差异.研究表明,方波与较高频率的组合刺激对肺腺癌细胞的生长增殖具有明显的抑制作用.
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肺一丸抑制肺腺癌LA一795细胞增殖的实验研究
本项研究观察了中药复方肺一丸对肺腺癌细胞增殖的影响,以及诱导LA-795肺腺癌细胞凋亡的实验研究.结果显示,中药复方肺一丸能明显抑制肺癌细胞的增殖,同时,流式细胞仪检测肺一丸诱导癌细胞凋亡的比率,和从凋亡细胞周期时相分析,表明中药复方肺一丸有明显诱导肺腺癌细胞凋亡的作用.
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低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用
目的 探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因.方法 体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用.通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制.结果 正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达.经低氧(0.5% O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平.HIF-1α mRNA水平在低氧6~12 h时降低,而HIF-2α mRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低.结论 低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达;HIF-2α与HIF-1α的mRNA和蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同,翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用;低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用.
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野生型DNA聚合酶β在肺腺癌细胞中的表达研究
目的 研究人野生型DNA聚合酶β基因编码的蛋白质在肺腺癌A549细胞株内的表达.方法 将人重组的携带野生型的DNA聚合酶β基因真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ用脂质体介导的方法转染A549细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,RT-PCR检测其在核酸水平的表达.结果野生型的DNA聚合酶β基因转染细胞后主要定位于细胞核内,而不合DNA聚合酶β基因的空质粒转染细胞后则主要表达在胞浆中,RT-PCR证实转染细胞中的野生型的DNA聚合酶β比未转染细胞表达量高.结论野生型的DNA聚合酶β基因在A549细胞中表达,且定位于胞核内,这对进一步研究肺癌的发生发展奠定了基础.
关键词： 野生型DNA聚合酶β 肺腺癌细胞 基因表达 -
整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与肺腺癌细胞凋亡关系的实验研究
目的探讨整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与人肺腺癌A549细胞凋亡之间的关系.方法无血清培养,以抗整合素α5亚基单克隆抗体(SAM-1)封闭A549细胞表面的整合素α5亚基,阻断其与纤维粘连蛋白的粘附作用.结果SAM-1封闭整合素α5亚基后细胞凋亡明显增强.各实验组AI值与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01),在一定范围内,呈剂量、时间依赖关系.结论整合素α5亚基与纤维粘连蛋白可能抑制体外无血清培养诱导的A549细胞的凋亡.
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TNP-470对肺腺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其与Flk-1表达的关系
目的:探讨TNP-470对肿瘤细胞诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其与血管内皮生长因子(VEGF)受体酪氨酸激酶受体(Flk-1)的关系.方法:培养肺腺癌AGZY-82A细胞株,并制备条件培养液,加入培养的血管内皮细胞,用免疫组化S-P法检测TNP-470对癌细胞诱导后内皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、p53和VEGF 受体Flk-1表达的影响.结果:TNP-470能抑制癌细胞诱导的内皮细胞表达PCNA,当TNP-470的浓度达102ng/ml,细胞增殖几乎停止;而凋亡相关基因蛋白p53的表达逐渐增加;并且TNP-470以剂量依赖方式抑制内皮细胞Flk-1的表达,当TNP-470浓度达104ng/ml时,Flk-1的表达几乎完全受到抑制.结论:TNP-470可以通过阻止肿瘤细胞诱导的内皮细胞表达VEGF受体,抑制内皮细胞的增殖,促进其凋亡,而达到体内抑制肿瘤生长和转移的作用.
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大豆皂甙对人肺腺癌细胞增殖抑制作用研究
目的探讨大豆皂甙(total soysaponin,TS)对体外培养人肺腺癌细胞系SPC-A-1的直接抑制作用及可能机制.方法通过克隆形成法、3H-TdR掺入法与四氮唑蓝比色法观察不同浓度TS的抑瘤效应.结果给药后SPC-A-1细胞增殖受抑制,0.5 mg/ml剂量组抑制作用佳,并出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变;动态观察发现给药后24 h已有明显抑制作用,72 h达高峰.给药组克隆形成数、cpm和A值明显少于对照组(P＜0.05),3H-TdR掺入抑制率增加,细胞生存率下降.结论 TS通过抑制细胞;DNA合成、干扰细胞代谢及改变细胞外衣的性质,抑制贴附型细胞贴壁生长,对SPC-A-1细胞具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用.
