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腺病毒携带p53、GM-CSF、B7-1基因转染乳腺癌细胞诱导抗肿瘤免疫的研究
近年来肿瘤的基因免疫治疗研究已成为广大学者关注热点.其目的是通过对肿瘤细胞的基因修饰,提高其免疫原性、打破免疫逃避和免疫耐受,诱导免疫系统对肿瘤细胞的杀伤.本研究对腺病毒转染的p53、GM-CSF、B7-1三种外源基因是否可以提高乳腺癌细胞的免疫原性,以及乳腺癌基因免疫治疗的可行性,进行了并以肺腺癌细胞进行对比研究.
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恶性淋巴瘤基因治疗的新进展
目前,恶性淋巴瘤的主要治疗方法是联合化学药物治疗和放射治疗.对于难治性病例,骨髓移植也可能取得一定疗效.但是,上述方法对于大多数复发及高龄患者来说,进一步提高其生存率已十分有限.近年来,恶性淋巴瘤的基因治疗研究,作为一种新的治疗手段,已越来越引起人们的关注.此外,为了增强肿瘤免疫以达到杀伤全部肿瘤细胞的目的,转基因的抗肿瘤疫苗的研究也引起人们的极大重视.本文拟就恶性淋巴瘤基因治疗的主要策略、现状及其新进展,做一简要介绍.1 恶性淋巴瘤的基因治疗方法恶性淋巴瘤的基因治疗方法主要包括:直接杀伤肿瘤细胞的肿瘤靶向基因治疗;增强肿瘤免疫机能的基因免疫治疗;将耐药基因导入骨髓细胞使之获得耐药表型,从而增加骨髓对化疗药物的耐受性等方法.恶性淋巴瘤基因治疗的主要方法有:①直接杀伤肿瘤细胞的肿瘤靶向基因治疗,包括反义肿瘤基因治疗(Bcl-2,c-myc,NPM-ALK);肿瘤抑制基因治疗(p53,Rb);酶/前体药物系统基因治疗(HSV-tk/GCV,Cytosine deaminase/5-FC).②间接抑制肿瘤增殖的基因免疫治疗,包括肿瘤特异性免疫增强剂(B细胞淋巴细胞特异性抗原);肿瘤非特异性免疫增强剂(细胞因子IL-2,IL-12,GM-CSF,IL-1α);免疫增强因子(IP10,MCP3);免疫辅助因子(B7-1,B7-2,CD40ligand);生长调控基因(CpG岛,ISS).③提高肿瘤化学药物治疗耐受性的基因治疗,为耐药基因导入骨髓细胞(MDR1,MGMT).肿瘤靶向基因治疗是指目的基因能靶向导入特定组织细胞或能在其中靶向表达,从而高效率杀伤肿瘤细胞,减少正常细胞的伤害.Bcl-2、c-myc基因,以及在未分化大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lyonphoma)中经常出现的未分化大细胞淋巴瘤核苷酸激酶(nucleophosmin anaplastic lymphoma kinase,NPM-ALK)融合基因可用作反义基因治疗的靶基因[1].反义基因治疗就是应用反义核酸在转录和翻译水平阻断某些异常基因的表达,以期阻断
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Ad5F35-LMP2重组腺病毒的构建及鉴定
目的:构建Ad5F35-LMP2重组腺病毒.方法:分别以EcoR Ⅰ单酶切pSH-LMP2和pDC316,将LMP2目的基因片段和线性化的pDC3l6连接,克隆构建pDC3l6-LMP2,以PCR和酶切的方法鉴定插入方向正确.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒Ad5F35-LMP2,PCR及间接免疫荧光进行鉴定.结果:经PCR和酶切鉴定证实pDC3l6-LMP2构建成功.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad5F35-LMP2构建完成,间接免疫荧光鉴定LMP2蛋白能在细胞膜上有效表达.结论:本实验成功构建了含EB病毒LMP2全序列的Ad5F35-LMP2重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-LMP2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础.
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重组人p53腺病毒转染急性早幼粒细胞白血病源性树突状细胞的免疫效应研究
目的 研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)转染急性早幼粒细胞白血病(APL)源性树突状细胞(DC)的免疫效应.方法 采集APL初治患者骨髓单个核细胞在完全培养基中培养并以r-Ad-p53/LacZ(腺病毒空载体)处理.Western blot鉴定p53蛋白的表达,流式细胞仪检测DC免疫表型、酶联免疫吸附法(ELISA)进行上清夜IL-12水平测定,MTT法观察rAd-p53-APL-DC刺激自体T淋巴细胞增殖能力(MLR).结果 转染rAd-p53或LacZ可明显上调APL-DC表面CD80、CD86、CD83、CD1a、CD40和HLA-DR表达;转染rAd-p53后72小时rAd-p53-APL-DC上清液中IL-12分泌水平明显增加;刺激自体淋巴细胞增殖的能力随rAd-p53-APL-DC与淋巴细胞比例的增加而升高(P<0.05).结论 利用rAd-p53转染急性早幼粒细胞白血病细胞来源树突状细胞(APL-DC),可有效刺激APL-DC的成熟,其介导的MLR明显强于非rAd-p53组所诱导的DC.
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HIV-Ⅰ慢病毒载体的研究进展与应用
基因治疗是治疗肿瘤、遗传病等难治性疾病的有效手段之一,但目前的基因转移方法存在一定的局限性,成为基因治疗和广泛应用的障碍.以1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)为基础构建的慢病毒载体(LV)具有感染分裂及非分裂细胞、使目的 基因产物表达稳定、表达时间长、载体自身免疫原性小等优点,尤其是LV能有效诱导免疫应答,抑制肿瘤生长,诱导移植免疫耐受等,是很有发展潜力的体内基因治疗新载体.
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肝细胞癌的基因免疫治疗
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是导致癌性死亡的第三大原因,每年有100万新病例.目前更多的治疗手段是外科、移植、放疗或化疗及基因等综合治疗,其中基因免疫治疗被认为是有前途的研究方向之一.现仅就肝细胞癌近的治疗热点基因免疫治疗作一综述.
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DC靶向性DNA疫苗在人小细胞肺癌细胞株中的抗肿瘤作用
小细胞肺癌( SCLC)是肺癌中恶性程度高的一种,针对小细胞肺癌靶抗原的基因免疫治疗是其防治的方向.前胃泌素释放肽(PGRP)是SCLC的特异性肿瘤标志物[1].我们从人小细胞肺癌细胞中克隆了PGRP基因,构建具有DC靶向的DNA疫苗,免疫小鼠后得到了较理想的免疫效果.
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1型糖尿病治疗研究进展
1型糖尿病是一种自身免疫性疾病,学者们对于其治疗的研究取得了许多新的突破,现就近几年在治疗1型糖尿病方面取得的新研究进展进行了综述.
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胃癌的基因免疫治疗
虽然在过去的几十年里全世界胃癌总体的发病率、死亡率有所下降,但它仍然是世界上第四大常见的恶性肿瘤之一,也是癌症的第二大死因[1].目前对于胃癌的治疗同其他恶性肿瘤一样仍以手术、化疗、放疗为主,随着对肿瘤发生发展的进一步认识.以及免疫学的发展,逐渐出现了一种新的肿瘤治疗模式--肿瘤生物疗法(biotherapy).近年来这种疗法发展迅速,本文仅就其中基因技术对胃癌免疫治疗方面的影响(简称为胃癌的基因免疫治疗)作一介绍.
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肝癌基因治疗研究新进展
1 概述肝癌的发病率在全世界日益增高,肝脏也是全身恶性肿瘤常见的转移部位.肝脏肿瘤早期往往不易发现,一旦出现症状多数已属中晚期,如果不能彻底手术切除,目前仍缺乏其他有效的治疗方法.但是,近十余年来,随着分子生物学技术的发展,基因治疗的问世开辟了肝癌治疗的新途径.本文就肝癌基因治疗研究所获得的新成就进行综述.