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骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎氧化损伤及低氧诱导因子的作用
目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脂质过氧化物（LPO）及低氧诱导因子-1α（HIF -1α）、低氧诱导因子-2α（HIF -2α）、血管内皮生长因子（VEGF）的影响，探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎（OA）软骨损伤的作用机制。方法60只雌性 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、骨灵膏组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组6组，每组10只，除正常组外其余各组采用冷固法6周建立 OA 模型，造模成功后除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外，其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃，给药8周后，取大鼠血清、膝关节软骨组织，采用ELISA 检测血清 SOD、MDA、LPO 的含量，免疫荧光法检测 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性表达，FQ- RT - PCR 检测 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达。结果模型组与正常组及骨灵膏组比较能显著增加血清 MDA、LPO 的含量（P ﹤0.01），增加 SOD 的含量（P ﹤0.01）；骨灵膏组与骨膏及灵膏比较能增加 SOD 的含量（P ﹤0.01），降低 MDA、LPO 的含量（P ﹤0.01）；模型组与正常组比较能显著增加软骨 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性率（P ﹤0.01），骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性率（P ﹤0.01）；模型组与正常组比较能显著增加软骨 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达（P ﹤0.01），骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达（P ﹤0.01）。结论骨灵膏可能通过增加血清SOD 含量，降低 LPO、MDA 的含量，纠正 OA 氧代谢失衡对软骨组织的氧化损伤，抑制组织 HIF -1α、HIF -2α mRNA 的表达，从而抑制异常低氧环境 HIF -1α向 HIF -2α的转化，降低其下游靶基因VEGF mRNA 在软骨组织的表达，减轻了关节骨赘的形成，对抗 OA 软骨损伤，其作用明显优于骨膏、灵膏、塞来昔布。
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HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义
目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义.方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达.结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1%、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关.胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织.结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用.
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低氧诱导因子-2α与CITED2、PTPRZ1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的 通过检测低氧诱导因子-2a(HIF-2α)、CITED2和PTPRZ1在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达;分析三者在PTC发生、发展中的作用及临床意义,探讨HIF-2α在PTC中的作用机制.方法 采用免疫组织化学法、Western blotting及Real-time PCR法检测HIF-2α、CITED2和PTPRZ1在50例甲状腺乳头状癌中的表达,并分析三者的变化与临床病理特征的关系.结果 PTC组织中HIF-2α、CITED2和PTPRZ1的mRNA和蛋白表达水平明显高于三者在甲状腺腺瘤组织和瘤旁正常组织中的表达(P＜0.05),且蛋白表达量与PTC淋巴结转移、病理分期及肿瘤大小有关(P＜0.05),而与PTC患者年龄、性别无关(P＞0.05).结论 在PTC中HIF-2α、CITED2和PTPRZ1蛋白的高表达与肿瘤的淋巴结转移、大小和临床病理分期呈正相关,HIF-2αt可能通过CITED2和PTPRZ1的高表达促进PTC的发生、发展、侵袭及转移,三者在PTC的发生、发展和转移的过程中起重要的作用.
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常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌对人胃癌SGC7901细胞系HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:观察常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对人胃癌SGC7901细胞系低氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)、ABCG2表达的影响,初步探讨H.pylori在胃癌发生发展中的干细胞机制,及其与肿瘤微环境低氧的协同作用.方法:内镜下采集胃黏膜标本,行H.pylori培养并鉴定,PCR方法检测H.pylori CagA+基因.CagA+ H.pylori与胃癌SGC7901细胞于常氧和低氧环境下共培养48 h(分常氧对照组、低氧对照组、常氧CagA+H.pylori组、低氧CagA+ H.pylori组).免疫细胞化学法检测HIF-2α和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:免疫细胞化学结果显示:常氧下胃癌SGC7901细胞HIF-2α、ABCG2蛋白呈低水平表达,低氧和CagA+H.pylori均能显著诱导HIF-2α、ABCG2蛋白表达(与常氧对照组相比,均P＜0.01),与低氧对照组和常氧CagA+H.pylori组相比,低氧CagA+H.pylori组表达进一步升高(均P＜0.01).相关分析显示HIF-2α与ABCG2表达呈正相关(r=0.976,P＜0.05).RT-PCR检测ABCG2 mRNA表达结果与免疫细胞化学一致.结论:CagA+ H.pylori可刺激胃癌细胞HIF-2α、ABCG2表达,低氧环境下其表达进一步增加,表明CagA+ H.pylori和低氧对HIF-2α、ABCG2的表达有协同作用.提示CagA+H.pylori和低氧可能是诱导胃癌细胞干细胞化及化疗抵抗的重要原因.
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5-Fu对低氧下胃癌SGC7901细胞系中SP细胞比例及HIF-2α、ABCG2表达的影响
目的:探讨低氧下5-Fu化疗抵抗的机制.方法:MTT检测常氧和低氧下的细胞活力,并计算5-Fu的半数抑制浓度(IC50).以IC50的5-Fu分别作用细胞常氧和低氧组细胞24、48和72h后,收集标本,Hoechst33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫细胞化学法检测低氧诱导因子(hypoxiainducible factor-2α,HIF-2α),荧光免疫细胞化学法检测ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)的表达.结果:常氧和低氧下,5-Fu均呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞增殖,其IC50分别为100、200 mg/L.常氧下SP细胞的比例为1.87％,低氧诱导后其比例逐渐增加.常氧下5-Fu-IC50作用于细胞不用时间后,SP细胞的比例无明显变化,低氧下其比例却逐渐增加.常氧下,HIF-2α和ABCG2蛋白呈低水平表达,且5-Fu-IC50作用于不同时间后也无明显变化,低氧下5-Fu-IC50作用于不同时间后二者的表达逐渐增加.结论:低氧下5-Fu对胃癌SGC7901细胞存在化疗抵抗可能与低氧通过诱导HIF-2α-ABCG2通路的表达、促进肿瘤细胞的干细胞化有关,这可能是肿瘤化疗抵抗和复发的根源.
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BNP、HIF-2α与高原肺动脉高压关系的研究进展
高原肺动脉高压的发病率及病死率均高,一直是威胁高原移居人群身体健康的重要原因.国内外学者通过对B型脑钠肽、低氧诱导因子-2α在低压、低氧条件下肺动脉高压患者血清含量变化及相关性的研究,为高原肺动脉高压的预防提供了理论依据及靶向治疗方法.现就B型脑钠肽、低氧诱导因子-2α在高原肺动脉高压中的研究进展作一阐述.
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高原地区老年男性骨质疏松患者血清HIF-1α、HIF-2α、VEGF及骨代谢指标的相关性研究
目的 探讨老年男性骨质疏松患者血清低氧诱导因子、血管内皮生长因子、骨钙素及骨转换生化指标水平的变化及相关性.方法 采用酶联免疫吸附法ELISA检测60例老年骨质疏松组和58例正常老年男性对照组的血清低氧诱导因子、血管内皮生长因子、骨钙素及抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5),双能X线骨密度测定仪测定三个区域的骨密度.结果 OP组与健康对照组比较,骨质疏松组患者的血清BGP水平和三个部位的骨密度值BMD明显下降,同时血清HIF-1α、VEGF和TRACP-5水平明显升高(P＜0.05);相关性结果显示,OP组患者血清HIF-1 α与VEGF、BGP成明显的正相关(P＜0.05),而与BMD和TRACP-5b成负相关(P＜0.05);血清VEGF浓度与BMD之间存在着负相关性(P＜0.05).结论 在高原地区对于骨质疏松患者,应注意补偿氧气减少缺氧性的损伤,纠正缺氧状况,并结合补充钙质增加锻炼等常规治疗措施,能够有效的预防骨质疏松的发生及发展.
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低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例影响及其与HIF-2α和ABCG2表达相关性的分析
目的:通过观察低氧对SGC7901细胞株SP细胞的影响及其与HIF-2α和ABCG2表达变化的关系,初步探讨低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:用氯化钴(CoCl2)创建低氧模型.Hoechst 33342染色法检测SP细胞比例,免疫荧光细胞化学法检测ABCG2在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2a和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:SP细胞比例为2.36％,低氧诱导后其比例逐渐增加,P＜0.05.ABCG2在SP细胞中的表达明显高于非SP细胞(P＜0.01),低氧诱导后在SP细胞和非SP细胞中的表达均增强(P值均＜0.01),且在SP细胞中的表达高于非SP细胞,P＜0.01.低氧诱导后HIF-2a、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA的表达较常氧组明显增强(P值均＜0.01),且HIF-2α与ABCG2蛋白表达呈高度正相关(n=4,r=0.893,P＜0.05).结论:低氧能促进SGC7901细胞株SP细胞比例的增加,其机制可能与低氧激活HIF-2α-ABCG2通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.
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低氧诱导因子-2α在肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的:分析低氧诱导因子-2α(HIF-2α)在肝细胞癌组织中的表达,探讨其与肝细胞癌临床病理特征的相关性及临床意义.方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院104例经手术治疗并有完整随访资料的肝细胞癌和10例正常肝组织标本,用免疫组化方法观察HIF-2α和CD34在癌组织中的表达情况,分析HIF-2α表达水平与肝细胞癌微血管密度、临床病理特征及患者预后的关系.结果:正常肝组织无HIF-2α表达,104例患者中HIF-2α蛋白表达(-)32例,(+)32例,(++)40例;HIF-2α表达与肝细胞癌的分化程度、TNM分期及伴发肝硬化呈正相关关系(P<0.05);HIF-2α蛋白较高表达组MVD显著高于HIF-2α蛋白较低表达组(P<0.05);HIF-2α高表达患者组的3年生存率低于低表达患者组(12.8% vs 60.8%,P<0.001).经Cox多因素回归分析,HIF-2α是肝细胞癌的独立预后因素(P<0.001).结论:HIF-2α的阳性表达与肝细胞癌血管新生、病理分级、TNM分期及总生存率密切相关;提示HIF-2α可作为评估肝细胞癌进展及预后的指标之一.
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低氧诱导因子-2α基因沉默对骨肉瘤细胞株MG-63生物学行为的影响
目的：探讨低氧诱导因子-2α（HIF-2α）基因沉默对低氧状态下骨肉瘤MG-63细胞的影响。方法Western Blot检测MG-63细胞HIF-2α表达。利用小干扰RNA（siRNA）获得MG-63/siHIF-2α（siHIF-2α）细胞，阴性对照为MG-63/scramble(NC)细胞。Western Blot检测MG-63、NC和siHIF-2α细胞中HIF-2α、血管内皮生长因子（VEGF）、p-Erk/Erk及Mcl-1的表达。低氧下培养NC和siHIF-2α细胞，MTS试剂检测细胞活性，划痕迁移试验检测迁移能力，克隆集落形成试验检测集落形成率，裸鼠皮下移植瘤试验检测体内肿瘤生长情况。结果低氧可诱导MG-63细胞的HIF-2α蛋白表达，并呈时间依赖性(F=2037.412，P＜0.001)。低氧下siHIF-2α细胞的HIF-2α表达低于NC细胞（P＜0.01）。低氧12 h和24 h，siHIF-2α组细胞活性均低于NC组，相对划痕宽度均大于NC组（P＜0.05或P＜0.01）。1000~5000细胞种植数的siHIF-2α组的集落形成率均小于NC组(P＜0.05或P＜0.01)。低氧下siHIF-2α细胞的VEGF、p-Erk/Erk和Mcl-1表达均低于NC细胞（P＜0.01）。裸鼠皮下移植瘤siHIF-2α组肿瘤体积、质量和密度均小于NC组(P＜0.01)。结论阻断HIF-2α信号通路可作为骨肉瘤临床治疗的新策略。
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低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用
目的 探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因.方法 体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用.通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制.结果 正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达.经低氧(0.5% O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平.HIF-1α mRNA水平在低氧6~12 h时降低,而HIF-2α mRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低.结论 低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达;HIF-2α与HIF-1α的mRNA和蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同,翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用;低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用.
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HIF-1α和HIF-2αmRNA在肾透明细胞癌中的表达及临床意义
目的研究低氧诱导因子(HIF)-1α和-2α rmRNA在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测26例肾透明细胞癌组织、15例远离肿瘤的癌周肾脏组织及5例良性疾病肾脏组织中HIF-1α和HIF-2α mRNA的表达情况.结果HIF-1α mRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达较在对照组织中增高,但这种差异没有统计学意义(P=0.053);所有肾透明细胞癌标本和部分对照肾脏组织中均有HIF-2αmRNA的表达,肾透明细胞癌中的表达较对照组织明显增高并具有显著统计学意义(P=0.0016).结论HIF-2α mRNA的表达可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用.
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HIF-1α和 HIF-2α在低氧性肺动脉高压中的不同作用研究进展
低氧诱导因子家族（HIFs）是机体应对低氧环境时的主要调节因子，它们与低氧引起的肺组织细胞损伤以及异常增殖有关，其中又以低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和低氧诱导因子-2α（HIF-2α）的作用为明显。该文主要对 HIF-1α、HIF-2α在结构功能上的异同和在低氧性肺动脉高压中作用的研究现状作一综述。
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HIF-2α基因下调后的诱导多能干细胞移植对大鼠脑缺血损伤治疗作用的影响
目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-2α基因下调后的诱导多能干细胞(iPSCs)移植对大鼠脑缺血损伤治疗作用的影响.方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):iPSCs治疗组、iPSCs+siHIF-2α组,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组.所有大鼠均采用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型,栓塞90 min后进行再灌注.再灌注后3 d进行iPSCs移植、iPSCs+siHIF-2α移植或PBS注射.在移植之前及之后的第2、4周,行神经行为学评价并采用小动物正电子发射体层仪(micro-PET)扫描测定18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)的摄取值.移植后第4周,处死大鼠行免疫荧光检测神经细胞标志物.结果 在干细胞移植后第2、4周,iPSCs治疗组的神经功能评分均明显低于PBS对照组(均为P<0.05),而iPSCs+siHIF-2α组的神经功能评分在这两个时间点均高于iPSCs治疗组(均为P<0.05).在干细胞移植后的第2、4周,与PBS对照组比较,iPSCs治疗组和iPSC+siHIF-2α组脑缺血大鼠脑部的糖代谢水平(损伤侧/正常侧)明显增加(均为P<0.001).干细胞移植后第2周,iPSCs治疗组大鼠脑缺血区糖代谢水平明显高于iPSCs+siHIF-2α组(P<0.001).此后iPSCs+siHIF-2α组大鼠脑缺血区糖代谢水平持续上升,至干细胞移植后第4周,与iPSCs治疗组较为接近,但仍低于iPSCs治疗组(P=0.025).免疫荧光结果提示移植的干细胞存活并迁移至梗死区周边,并且大部分的移植干细胞均表达了神经细胞标志物.结论 iPSCs移植对大鼠脑缺血损伤有明显的治疗作用,HIF-2α基因下调对iPSCs的治疗作用有一定的影响.
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低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例的影响与HIF-2α、OCT-4表达变化的关系
目的:通过观察低氧对人胃癌SGC7901细胞株侧群(side population,SP)细胞比例的影响及其与HIF-2α和OCT-4表达变化的关系,初步研究低氧对肿瘤干细胞的影响及机制.方法:Hoechst33342染色检测人胃癌SGC7901细胞系SP细胞比例,免疫荧光化学法检测OCT-4在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2α和OCT-4蛋白的表达.结果:常氧下人胃癌SGC7901细胞系中SP细胞的比例为2.36%,低氧诱导24、48、72h后其比例逐渐增加,分别为3.01%、3.23%、3.45%(P<0.05);常氧下OCT-4在SP和非SP细胞中的表达差异无统计学意义(P>0.05),低氧诱导24、48、72h后,OCT-4在SP细胞和非SP细胞中的表达逐渐增强(P<0.05),在SP细胞中的表达要高于非SP细胞.常氧下HIF-2α和OCT-4蛋白呈低水平表达,低氧诱导24、48、72h后,二者的表达逐渐增加(P<0.05),且HIF-2α和OCT-4蛋白呈高度正相关(P<0.05).结论:低氧可使人胃癌SGC7901细胞系中的SP细胞增多,其机制可能与低氧诱导HIF-2α-OCT4通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关.
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shRNA干扰肾癌细胞株786-O和OS-RC-2中HIF-2α的表达对VEGF的影响
目的 构建在哺乳动物细胞中表达的低氧诱导因子-2(HIF-2α)的短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,在体外模拟肿瘤常氧和低氧环境下研究对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.探讨HIF-2α、VEGF两者之间及其与肾透明细胞癌(CCRCC)的关系,HIF-2α可能为CCRCC潜在的新效靶.方法 构建HIF-2αshRNA真核表达载体质粒,shRNA测序鉴定.150 umol/L氯化钴(CoCl2)模拟细胞低氧环境.设对照组(空白、阴性)和实验组.空白对照组不做转染,阴性对照组转染空质粒,实验组转染HIF-2αshRNA重组质粒,每组均设置常氧和低氧环境组.采用Real time-PCR技术检测786-O和OS-RC-2细胞中HIF-2α基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测VEGF蛋白表达情况.结果 DNA测序证实重组质粒构建成功,shRNA转染786-O和OS-RC-2细胞,实验组中HIF-2αmRNA表达明显受到抑制,且常氧较低氧环境下HIF-2αmRNA表达降低,低氧环境下凋亡显著;常氧和低氧环境下,实验组VEGF蛋白表达量均下降,且常氧环境下蛋白表达下降明显.结论 低氧环境下,HIF-2αmRNA表达量升高,促进VEGF蛋白表达.干扰HIF-2α基因后,细胞凋亡率升高,抑制VEGF蛋白表达. 该基因可能为治疗CCRCC提供了新的效靶,为下一步实验鉴定奠定基础.
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低氧诱导因子-2α和血管内皮生长因子在肾细胞癌中的表达及意义
目的 探讨低氧诱导因子-2α(HIF-2α)和血管内皮生长因子(VEGF)在肾细胞癌(RCC)中的表达及意义.方法 免疫组织化学方法检测76例RCC组织和12例癌旁正常组织中HIF-2α和VEGF的表达水平,分析与肾细胞癌的相关性.结果 HIF-2α、VEGF在正常肾组织中不表达,而在肾细胞癌组织中表达较强.HIF-2α与肿瘤组织的病理类型、病理分级及临床分期有显著相关性,VEGF与肿瘤组织病理分级及临床分期有显著相关性.结论 HIF-2α和VEGF与肾细胞癌的生长密切相关,HIF-2α和VEGF的研究可能成为治疗肾细胞癌患者潜在的生物靶位.
