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促进脂肪移植的佳SVFs浓度的实验研究
目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组)；②1 × 106个/ml(B组)；③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞ 0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.
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不同细胞促进脂肪移植存活的实验研究
目的 探讨应用自人脂肪组织来源的不同细胞辅助脂肪移植,寻找促进移植物存活率的佳种子细胞的有效方法,为干细胞进一步运用于临床提供实验依据.方法 从临床抽脂病人获取脂肪组织并提炼细胞,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与以下细胞进行混合处理:(1)低氧脂肪来源间充质干细胞(A组)；(2)脂肪来源间充质干细胞(B组)；(3)血管基质层细胞(SVFs)(C组)；(4)加完全培养基的单纯脂肪颗粒为对照组(D组)脂肪颗粒与相应细胞混合后,注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况,通过组织学、HE染色等方法进行分析.结果 A～D组湿重分别为(61.67±8.165)、(91.67±1.472)、(96.67±5.164)和(40.83±4.916)mg,A、B、C组脂肪存活率均高于D组(P＜0.05),B、C两组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)且都高于A组.A、B、C组血管密度均高于组D,且C组明显高于其他3组(P＜0.05).A、B、C组存活脂肪细胞计数均高于D组,且B、C组高(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P＜0.05).结论 来源于人自体干细胞复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中血管基质层细胞及脂肪来源间充质干细胞移植脂肪的存活率高.
关键词： 血管基质层细胞 脂肪来源间充质干细胞 缺氧 脂肪移植 -
人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究
目的 探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础.方法 取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065％、0.125％、0.185％3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs.收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率.用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125％浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况；将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力.结果 0.065％、0.125％及0.185％浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01);细胞成活率分别为91％±2％、90％±2％、81％±2％,0.065％浓度组和0.125％浓度组均显著高于0.185％浓度组(P＜0.01),0.065％浓度组和0.125％浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881).倒置荧光显微镜观察示,0.125％浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光；DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代.MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合.结论 0.125％浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度；DiI可有效标记SVFs.
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湿性脂肪干细胞辅助脂肪移植在面部轮廓重塑中的应用
目的 探讨湿性脂肪干细胞辅助自体脂肪颗粒注射移植在面部轮廓重塑中的应用,观察其疗效.方法 选取25例先天或后天性因素导致额部、颊部、眶周、颏部、颞部等凹陷、形态不良的患者,抽取大腿部脂肪颗粒,静置、纯化等方法处理,将未分离的脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSC)与基质血管成分(stromal vascular fraction,SVF)复合脂肪颗粒,30％超量多层次多隧道均匀注射于面部标记区域.每病例手术1～3次,间隔3～6个月.通过比较术前及术后照片、脂肪吸收情况和患者自我评价等指标进行效果评价.结果 25例患者共86处手术部位,随访3～24个月,效果较满意,无脂肪液化、感染破溃等并发症.结论 湿性脂肪干细胞辅助的脂肪移植应用于面部轮廓重塑的治疗操作简单、效果满意、创伤小、患者容易接受,手术效果理想.
