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磷脂酶C-γ1在高温诱导热休克蛋白70表达中的作用
目的:研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)表达的影响.方法:以基因敲除方法建立的缺失plcg1基因(plcg1-/-)及野生型(plcg1+/+)小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western 免疫印迹-增强化学发光法检测它们在高温诱导时的HSP 70表达,并以酶联免疫吸附(ELISA)法做半定量分析,MTT法对比分析两种细胞的热耐受力.结果:两种细胞经43℃与45℃高温诱导30 min,都能引起HSP 70合成,但plcg1-/-细胞HSP 70表达水平显著低于plcg1+/+细胞,P<0.01;较低温度(41℃)不能诱导plcg1-/-细胞HSP 70表达,却能引起plcg1+/+细胞HSP 70表达,且plcg1-/-细胞的热耐力亦明显低于plcg1+/+细胞.结论:PLC-γ1参与了热诱导成纤维细胞HSP 70表达的信号转导.
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低血清培养对瘢痕成纤维细胞PCNA、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的影响
近年报道瘢痕皮下组织氧分压只是正常组织的27%,低氧分压是由于缺氧造成胶原蛋白沉积导致的血管阻塞而加重缺氧和缺血现象使瘢痕疙瘩局部处于低氧、低血供、低营养状态[1,2]. 本实验旨在研究低营养状态下瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的增殖及生物合成功能.1 材料与方法低血清成纤维细胞培养方法:将体外培养5代以内的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞(fibroblast,FB)各6例分别置于含0.5%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液(低血清培养)中培养7 d,取材.以含10% (体积分数)胎牛血清的DMEM培养液为对照组.增殖细胞核内抗原(proliferating cell nuclear antigen, PC NA) 、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的检测方法:以上各组标本经100 g*L-1多聚甲醛(pH 7.2～ 7.5)固定10 min后,利用免疫组织化学方法(SP法,试剂盒由北京中山生物技术有限公司购置)检测增殖细胞核内抗原PCNA、p16、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的含量.
关键词： 瘢痕疙瘩/病理生理学 成纤维细胞/代谢 胶原/代谢 -
加减益气聪明汤及单味黄芪药物血清对成纤维细胞胶原合成速率的影响
本实验观察了加减益气聪明汤和单味黄芪鼠血清对体外培养成纤维细胞胶原合成速率的影响.结果表明与青年鼠血清比较,老年鼠血清可明显增高成纤维细胞胶原合成速率;而加减益气聪明汤鼠血清和单味黄芪鼠血清均可显著降低成纤维细胞胶原合成速率.提示补气方药可以通过抑制胶原蛋白的合成,改善结缔组织增生和血管硬化,增加血管弹性,提高供血量,从而使衰老机体的动脉硬化症状得到改善.
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肝细胞生长因子对转化生长因子-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生及转分化的抑制作用
目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子.β1(TGF.β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生和转分化的影响.方法 人Tenon囊成纤维细胞进行常规培养后分为空白对照组、TGF.β1处理组及不同质量浓度HGF+TGF.β1组.TGF.β1处理组在细胞培养液中添加10μg/L TGF.β1,不同质量浓度HGF+TGF.β1组在细胞培养液中分别添加10μg/L TGF.β1,然后分别添加不同质量浓度的HGF(25、50、100、200μg/L),采用甲基偶氮四唑(MTT)法检测波长560 nm处各组细胞的吸光度(A560);然后选用100μg/L的HGF进行干预,采用细胞免疫荧光染色技术检测人Tenon囊成纤维细胞中α.平滑肌肌动蛋白(α.SMA)的表达分布;采用Western blot法检测细胞中α.SMA蛋白的相对表达量.结果 体外培养的人Tenon囊成纤维细胞呈长梭形,边界清楚,细胞中波形蛋白表达阳性并定位于细胞质.MTT检测显示空白对照组、TGF.β1处理组及HGF25μg/L+TGF.β1组、HGF50μg/L+TGF.β1组、HGF100μg/L+TGF.β1组、HGF200μg/L+TGF.β1组细胞的增生值分别为0.203±0.025、0.497±0.101、0.426±0.062、0.354±0.040、0.272±0.084和0.241±0.011,组间比较差异有统计学意义(F=9.210,P=0.003),TGF.β1处理组细胞增生值明显高于空白对照组,不同质量浓度HGF+TGF.β1组细胞增生值均明显低于TGF.β1处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05).免疫荧光染色结果显示空白对照组细胞中未见α.SMA的表达,TGF.β1处理组及HGF100μg/L+TGF.β1组细胞的胞质中均可见α.SMA的表达,呈红色荧光,HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA表达荧光减弱,α.SMA表达细胞明显减少.TGF.β1处理组和HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA染色阳性细胞百分比分别为(60.0±4.7)％和(14.3±3.1)％,差异有统计学意义(t=19.856,P<0.001).Western blot检测显示空白对照组、TGF.β1处理组和HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA蛋白相对表达量分别为0.642±0.032、1.330±0.069和0.884±0.040,总体比较差异有统计学意义(F=13.370,P<0.001),其中TGF.β1处理组细胞中 α.SMA蛋白相对表达量明显高于空白对照组,HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA蛋白相对表达量明显低于TGF.β1处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 HGF抑制TGF.β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞的过度增生,下调细胞中α.SMA蛋白的表达,阻止成纤维细胞的表型转化.
