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乳腺癌组织与细胞株雄激素受体生物学作用分子机制探讨
目的 乳腺癌是激素依赖性肿瘤,除雌激素外,雄激素通过与雄激素受体(androgen receptor,AR)相结合在乳腺癌的发生发展中也发挥重要作用,但其机制以及对乳腺癌的意义并不明确,本研究通过探讨乳腺癌组织及细胞中AR的表达及分子机制,为乳腺癌的治疗寻找潜在的新靶点.方法 选取2013-01-01-2016-10-01郑州大学附属郑州中心医院经手术治疗的乳腺癌原发肿瘤患者组织标本150例,免疫组化法检测150例乳腺癌组织中AR蛋白的表达;蛋白质印迹法及RT-PCR法检测不同病理分级中AR蛋白表达;蛋白质印迹法、RT-PCR及免疫荧光的方法检测AR蛋白在转移及非转移性乳腺癌细胞株中的表达.应用miRanda软件平台预测可能作用于AR mRNA 3'UTR保守位点的miRNA.使用Real Time RT-PCR分析在非转移和转移乳腺癌细胞株中可能靶向AR mRNA的miRNA,并分析不同病理分级乳腺癌组织中可能靶向AR mRNA的miRNA.结果 AR蛋白在乳腺癌组织中表达与组织学分级呈负相关,r=-0.473,P＜0.001;Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ级相比,差异有统计学意义,x2=38.233,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,乳腺癌组织Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级积分光密度值(integrated option density,IOD)分别为2.291±0.265、0.229±0.030和0.277±0.043,Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级比较差异有统计学意义,z=-3.794,P＜0.001,即Ⅱ、Ⅲ级表达明显降低.Ⅱ级与Ⅲ级比较差异无统计学意义,z=-1.973,P=0.052.RT-PCR结果显示,AR蛋白在乳腺癌组织Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级中相对表达量分别为1.00±0.11、0.53±0.15和0.59±0.12,Ⅱ(t=6.177,P=0.003)、Ⅲ级(t=4.162,P=0.014)显著低于Ⅰ级,Ⅱ与Ⅲ级比较差异无统计学意义,t=-1.628,P=0.179.即病理分级Ⅰ级中AR蛋白及mRNA水平显著高于Ⅱ和Ⅲ级.非转移乳腺癌细胞株(BT-549)和转移乳腺癌细胞株(MDA-MB-23)中,AR蛋白的IOD比值分别为1.980±0.101和0.926±0.072,t=14.718,P＜0.001;BT-549和MDA-MB-231细胞系AR的mRNA相对表达量分别为1.000±0.110和0.020±0.012,t=107.245,P＜0.001.即MDA-MB-231细胞株中AR蛋白及mRNA水平显著低于BT-549细胞株.RT-PCR分析结果显示,转移乳腺癌细胞株中miR-873和miR-185表达高于非转移乳腺癌细胞株,并且病理分级Ⅰ级中miR-873和miR-185表达低于Ⅱ和Ⅲ级,但仅miR-873差异有统计学意义,F=11.065,P=0.010.结论 乳腺癌组织及细胞中AR表达与组织学分级及有无转移呈负相关,其机制可能与高级别乳腺癌组织中miR-873上调进而负调控ARmRNA有关.
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miR-873抑制肝细胞癌的侵袭与迁移
目的:检测miR-873在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探究其与HCC临床病理特征及HCC病人预后的相关性,进一步探究其对HCC细胞侵袭与迁移的影响.方法:应用Real-time PCR法检测90例HCC组织和对应癌旁组织中miR-873的表达水平;应用统计学方法分析miR-873的表达水平与HCC临床病理特征的相关性及对HCC病人预后的影响;应用Real-time PCR法检测HCC细胞系中miR-873的表达水平,并应用Transwell小室实验探究miR-873对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-873在90例HCC组织中的表达水平较癌旁组织显著下调(P<0.05);miR-873的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P<0.05);Kaplan-Meier曲线分析发现,miR-873低表达的患者生存率较差(P<0.05),且miR-873可作为肝癌病人术后生存的独立预测指标;miR-873在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97H、HepG2、SMMC-7721)的表达较正常肝细胞LO2显著下调(P<0.05);Transwell小室实验显示miR-873能显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-873在HCC中表达下调,与HCC的临床病理及HCC病人的预后相关,并且能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.
