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siRNA沉默Twist基因对结直肠癌细胞顺铂化疗敏感性的影响
目的 结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,本研究探讨应用小分子干扰RNA (siRNA)沉默Twist信号通路对结直肠癌顺铂化疗敏感性的影响及其可能机制.方法 0、0.0625、0.125、0.25、0.5和1μg/mL的顺铂作用于SW480和LoVo这种结直肠癌细胞株48 h.Twist-siRNA转染这2种结直肠癌细胞株.CCK-8法计算转染前后顺铂对于两者的抑制率.EdU法检测癌细胞增殖能力.Hoechest 3344荧光染色检测细胞形态.蛋白印迹法检测不同药物作用下的Twist及上皮间质化相关标志物的表达变化.结果 LoVo和SW480细胞组中Twist表达量分别为0.824±0.124和0.191±0.039 9;Twist在LoVo中高表达,在SW480中低表达,差异有统计学意义,P＜0.05.SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(3.394±0.083)和(6.737±0.796) μg/mL,P＜0.05.wist siRNA干扰后SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(0.113 7±0.008 8)和(0.459 7±0.025 0) μg/mL,与单用顺铂组相比,差异均有统计学意义,均P＜0.05.Hoechest3344荧光染色结果表明,Twist转染组比未转染组出现了更加明显的细胞凋亡形态变化.CCK-8检测结果显示,采用Twist siRNA干扰后SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(0.113 7±0.008 8)和(0.459 7±0.025 0)μg/mL,与单用顺铂组相比,差异有统计学意义,P＜0.05.EdU法检测结果显示,Twist siRNA+顺铂组、顺铂组和正常组SW480细胞增殖率分别为(14.63±1.33)％、(25.55±1.73)％和(51.23±3.31)％;LoVo细胞增殖率分别为(22.35±2.39)％、(29.27±1.85)％和(64.62±3.61)％;与正常组和单用顺铂组相比,Twist siRNA+顺铂组的细胞增殖率明显降低,差异均有统计学意义,均P＜0.05.蛋白印迹法结果表明,Twist siRNA作用的同时伴随E-cadherin表达升高,而Vimentin表达降低,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 应用siRNA降低Twist信号通路活性可通过抑制上皮间质化过程而增加结直肠癌对于顺铂的化疗敏感性.
关键词： 结直肠癌 Twist siRNA 上皮间质化 顺铂
