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抗核/分离和提纯文献资料
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特异性抗肝癌单链抗体的优化表达与纯化及其生物学活性鉴定
目的:制备有生物活性的特异性抗肝癌单链抗体.方法:以ITPG诱导大肠埃希茵HB2151表达可溶性抗肝癌单链抗体;利用HiTrap抗E Tag亲和层析柱对阳性克隆表达的单链抗体进行纯化;纯化后的单链抗体进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,以Bradford检测法测定其浓度,ELISA法及免疫组化法鉴定其生物学活性.结果:在培养基中加入0.4mol/L蔗糖,以IPTG 1mmol/L于30℃诱导12h,抗肝癌scFv可溶性表达量较多,纯化后可溶性抗肝癌scFv含量为325mg/L,相对分子质量为29×103.与肝癌细胞结合效价为1:64,与肝癌组织结合阳性率为75%,具有良好的生物学活性.结论:成功获得具有生物活性的特异性抗肝癌单链抗体,为肝癌靶向诊断及治疗的开发与应用奠定了基础.
