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高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库的建立
目的:以抑制性消减杂交技术分离高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P间差异表达的基因.方法:采用抑制性消减杂交技术,以高低转移力小鼠肝癌细胞Hca-F为检测子,以低转移力Hca-P细胞为驱赶子,分离高转移力癌细胞中高表达的基因的cDNA片段.将差异表达基因的cDNA片段插入T/A克隆载体,并通过热转化的方法转化大肠埃希菌DH-5α,建立了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库.以菌液PCR的方法检测随机挑选的白色菌落中插入片段的出现频率.提取14个重组质粒进行序列分析.结果:在消减文库中共获800个白色菌落,对随机挑选的160个白色菌落进行菌液PCR扩增,发现95%的白色菌落中含有100～700bp的插入片段.对重组质粒的序列分析和同源性比对发现,所获的14个序列中3个为已知基因,分别来自小鼠热休克蛋白、ribosomal protein S13、ethanol induced 6基因;4个可能来源于新基因;3个与3个不同的EST同源.结论:成功构建了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库,为今后高通量筛选癌淋巴道转移相关基因,奠定了坚实的基础.
